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linsui1989新蟲 (小有名氣)
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[求助]
熒光定量求大神賜教~~~
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我最近用RNA做標(biāo)準(zhǔn)品在建標(biāo)準(zhǔn)曲線，用的是一步法RT-PCR方法，兩次做出來的曲線都很凌亂，附圖兩張，求分析解釋。根據(jù)分光光度計(jì)的結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)品原液濃度大約是10的12次方個(gè)copies，260/280=2.00, 260/230=1.69, 求分析解釋。 sample2(1).sds_AmpPlot.jpg sample2(2).sds_AmpPlot.jpg |
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zzl2516
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2樓2013-11-21 16:49:06
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linsui1989
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4樓2013-11-21 19:07:25
【答案】應(yīng)助回帖
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1.你的最高濃度如果是10次方的話，Ct值是偏大了點(diǎn)，這個(gè)可能和你引物探針擴(kuò)增效率有關(guān)系，還有你的重復(fù)性不好，低濃度擴(kuò)增不好，可能和你體系有關(guān)系，試著去優(yōu)化下體系，調(diào)整下各試劑組份濃度，特別是你所用的酶，即使同樣的酶，對(duì)于不同體系它的比例也不盡相同，都去做些許調(diào)整吧，可能會(huì)取得好的結(jié)果。 2.重復(fù)性不好除了體系的問題，很多時(shí)候是操作者的操作手法等問題，請(qǐng)相信，雖然PCR是個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)，但是想做好并不是簡(jiǎn)單的事情，一兩次的實(shí)驗(yàn)不能說明任何問題。 |
5樓2013-11-22 09:09:29
vege的桌子
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6樓2013-11-22 11:00:28
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7樓2013-11-22 15:00:25
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