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xdfy0301新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
定點(diǎn)突變蛋白質(zhì)不表達(dá) 已有1人參與
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| 近期，做了幾個(gè)點(diǎn)的定點(diǎn)突變，突變點(diǎn)是通過(guò)軟件模擬得到的。通過(guò)突變，轉(zhuǎn)化發(fā)酵，結(jié)果突變體沒(méi)有酶活。突變體DNA測(cè)序表明突變正確，沒(méi)有移碼。但未能找到不表達(dá)的原因，向各位求助，指點(diǎn)一下何種原因?qū)е虏槐磉_(dá)，謝謝。 |
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xdfy0301
新蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2013-11-23 16:31:26
zh10246
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2樓2013-11-22 20:40:22
4樓2013-11-23 19:31:00
w_goodluck
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【答案】應(yīng)助回帖
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樓主！我和你遇到是同樣的問(wèn)題！我推測(cè)應(yīng)該是沒(méi)有表達(dá)！ 理由如下： 我用pET28a連接了一個(gè)目的基因（野生型），然后去做蛋白表達(dá)，SDSPAGE顯示表達(dá)強(qiáng)度很高（條帶很明顯）。 然后我自己設(shè)計(jì)引物做了一輪定點(diǎn)突變，測(cè)序結(jié)果正確，同樣去做蛋白表達(dá)，但是SDSPAGE就沒(méi)有對(duì)照條帶。 我推測(cè)的結(jié)果是沒(méi)有表達(dá)，但是沒(méi)有表達(dá)的原因說(shuō)不清楚，感覺(jué)特別奇怪。 |
5樓2013-12-05 20:14:03
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