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關(guān)于DEAE-52纖維素洗脫劑的問題 已有1人參與
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| 大家好，我在看關(guān)于多糖的DEAE-52的純化過程中，洗脫劑的問題不是很明白，我看有的用磷酸鹽緩沖液的，有的用NaCl Tris-HCl緩沖液的，有的用醋酸鹽的、有的用碳酸鈉的、有的用氫氧化鈉的、我看大多數(shù)用的最多的是不同梯度的NaCl進(jìn)行洗脫，搞不懂我自己要用哪種了,是根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的資源來選擇呢還是先做下預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索一下哪種好呢？要做預(yù)實(shí)驗(yàn)的話好麻煩呀。還有大家洗脫劑的用量是怎么確定的？我看文獻(xiàn)上有的說用量為柱體積的2-4倍，還是每管都用萘酚-硫酸檢測檢測，要是沒有紫色的環(huán)就說明洗脫干凈了再換下一種洗脫劑？要不用苯酚-硫酸檢測測其OD值，很小的話就換下一種洗脫劑？突然還有一個問題：收集峰位后，濃縮后就真空冷凍干燥嗎？那里面的NaCl怎么除去呀？否則它會結(jié)晶的呀，麻煩做過的有經(jīng)驗(yàn)的師兄師姐還有老師們給解答一下，非常感謝！ |
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神雕哥
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 首先洗脫劑，我覺得用NaCl就行，DEAE-52主要是分離中性多糖和酸性多糖，一般洗脫液只要能把結(jié)合在DEAE-52上的酸性多糖換洗下來就行。我當(dāng)時用0.1，0.3,0.5,0.7,0.9M的Nacl進(jìn)行的階段性洗脫，流速1mL/min，5mL一管，采用苯酚-硫酸法在490nm下測定A，繪制洗脫曲線。至于具體洗幾個柱體積，這的根據(jù)你樣品性質(zhì)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。我當(dāng)時都是洗的4個柱體積。然后根據(jù)結(jié)果再確定每個梯度具體洗幾個柱體積。收集峰位后， 濃縮，透析除鹽，然后再冷凍干燥，這樣里面得鹽就沒了，凍干后的樣品會很膨松。祝你實(shí)驗(yàn)成功 |
chong//蟲2樓2013-12-04 09:19:00
3樓2013-12-04 17:56:36
zjhhjz
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