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guoyongyue新蟲 (初入文壇)
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[求助]
DEAE-52纖維素柱求助 已有2人參與
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| 現(xiàn)在在做食用菌子實體多糖的分離純化，我用的是DEAE-52的纖維素柱，用0.05到0.5的NaCl 梯度洗脫，1.25ml/min，上樣量是1mg/ml 的多糖10ml，每管收集5ml，過了兩次，也有峰，但是純品太少，沒辦法富集，還想拿到純品，怎么辦呢？ |
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【答案】應助回帖
hsd3521: 應助指數(shù)+1 2012-11-16 20:30:51
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多糖醇沉的時候確實有兩層上面漂浮的一層是膠體狀的，下面一層是沉淀。膠體狀的我沒做過，我做的是下面的沉淀。我有以下建議: 建議一：柱子的規(guī)格。如果想大量的制備，當然是選擇稍稍大的柱子。直徑在2.0cm以上。 建議二：你上樣量�？梢陨陨约哟簏c多糖的上樣量。 建議三：多糖的濃度。你上樣上了10ml。盡量減小上樣體積，提高多糖濃度。 建議四：梯度洗脫的濃度選擇。0.05-0.5這個濃度，你是隨便選擇的。什么濃度是最適合的，是需要實驗依據(jù)的。你有兩種方案選擇：1、階段性梯度洗脫：洗脫液的濃度從0、到2mol/L，選擇適當?shù)牟煌瑵舛�，有低到高依次洗脫并分別收集。2、線性連續(xù)性梯度洗脫：洗脫濃度是從0-2mol/L，成線性、連續(xù)性洗脫，這種線性濃度你可以在去離子水中一邊接入柱子，一邊同時勻速加入高濃度的洗脫液2mol/L，同時不斷攪拌（磁力攪拌器），使溶液濃度從0慢慢逐步提高。 建議四：你要對以上收集的收集液，逐管或者隔管檢測多糖含量，從而來確定主峰的位置。以便選擇適當?shù)南疵摑舛�，從而�?yōu)化實驗參數(shù)。 建議四：細心、耐心加毅力。 祝你試驗成功。 |
10樓2012-11-16 11:16:22
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