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悅迷008木蟲 (著名寫手)
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[求助]
羧甲基纖維素和DEAE纖維素分離蛋白有什么區(qū)別？
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| 小弟在做蛋白質(zhì)分離純化實驗，需要用到羧甲基纖維素進行離子交換柱層析分離，但能不能用DEAE纖維素代替羧甲基纖維素進行分離純化？希望各位好心的師兄師姐幫忙解答一下，不勝感激！ |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-07-15 10:27:48
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-07-15 10:27:48
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這兩個填料雖然都是離子交換用的，但一個是弱陰一個是弱陽，效果不同，沒有一個能代替另一個的說法。 羧甲基纖維素是弱陽離子交換填料，要求使用時的pH值要低于目的蛋白質(zhì)等電點起碼0.5個pH值單位，為了達到較好的分離效果，實際使用時最好是低于1個以上pH值單位。在低pH值下，有的不耐酸的雜質(zhì)蛋白質(zhì)會變性，屆時離心除去，可首先去除一部分雜質(zhì)蛋白質(zhì)。 DEAE纖維素是弱陰離子交換層析填料，要求使用時的pH值要高于目的蛋白質(zhì)等電點起碼0.5個pH值單位，為了達到較好的分離效果，實際使用時最好是高于1個以上pH值單位。大多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點在6.0左右，可以耐受8.0，所以依據(jù)pH提高使得某些雜質(zhì)蛋白質(zhì)變性的做法多數(shù)情況下不可行。 這兩種填料的工作pH值不同，但都可以用氯化鈉來洗脫。交換基團不同，分離效果也不同，可以先用一種來純化，得到初步純化的產(chǎn)物之后再用另一種來純化。因為有些蛋白質(zhì)不能耐受酸，所以我建議先用羧甲基纖維素弱陰離子交換層析，再用DEAE纖維素弱陽離子交換層析，產(chǎn)物的純度比單用一種時更高。 在對蛋白質(zhì)的破壞方面，弱交換填料比強交換填料好，有的蛋白質(zhì)用強離子交換來純化，蛋白質(zhì)結(jié)合再交換之后會損失很多活力，但是弱離子交換則損失的活力較少。但是弱離子交換的分辨率比強離子交換差一些。如果純化得不好，又有強離子交換的，就試一下吧。 |
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悅迷0082樓2011-07-15 06:00:21
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