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[交流]
蛋白過纖維素柱的過程
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| 請問，蛋白過纖維素柱怎么確定纖維素的用量？怎么做小試來確定梯度？玻璃柱過柱子之前怎么洗？越詳細越好，新手不懂，感謝各位 |
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2樓2011-07-08 02:07:09
3樓2011-07-08 11:33:48
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如果是填料，說明書可能是沒有了。我這里有DEAE的說明書，我也用過這個層析柱。 空柱是要洗干凈才行的，至于裝柱，最好還是有連接器，不然裝不實，如果有空隙效果就會差一點了。你說的玻璃柱也不一定要玻璃柱，你用其它材質的也行，如果是玻璃，用氫氧化鈉洗的時候會有輕微的反應生成硅酸鈉，所以材質最好選擇能耐受高pH值的。 DEAE短時間內(nèi)能耐受pH1-14，但要注意是短時間，最多沖洗2個柱床體積就要改變回去，最好是中性的。工作時候pH2-9，但考慮到蛋白質過酸過堿會變性，所以最好是5-8，具體是多少還要看你的蛋白質而定，最好是看看各個pH值下你的蛋白質的半壽期。 填料的用量我覺得還是首先要看看你有多少填料，填料足夠了，你裝多大都行。至于摸索條件之類的，你就裝小的，5毫升就行，甚至1毫升也可以，這樣就能很快沖洗完一個柱床體積了。因為一倍柱床體積是不足以沖洗完全的，所以每做一個濃度都應該沖洗多于一倍，我用5倍，柱床體積越小就越節(jié)省時間。 至于摸索完洗脫條件之后，就要用來分離制備樣品，這時候用柱床體積大的，有利于結合較多的蛋白質，一次制備較多的蛋白質。你可以裝個20毫升的，隨你了。 自己裝的層析柱如果接頭合適，那也能用蛋白質純化儀的，那就不用裝小柱，直接裝大柱了，洗脫條件也不用摸索了，直接走0-100%氯化鈉連續(xù)線性梯度。 |
4樓2011-07-08 19:06:41
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