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暖木warm金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
蛋白過(guò)纖維素柱的過(guò)程
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| 請(qǐng)問(wèn)，蛋白過(guò)纖維素柱怎么確定纖維素的用量？怎么做小試來(lái)確定梯度？玻璃柱過(guò)柱子之前怎么洗？越詳細(xì)越好，新手不懂，感謝各位 |
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2樓2011-07-08 02:07:09
冼亮淀粉酶
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暖木warm(金幣+3): 非常感謝 2011-07-08 21:57:34
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如果是填料，說(shuō)明書(shū)可能是沒(méi)有了。我這里有DEAE的說(shuō)明書(shū)，我也用過(guò)這個(gè)層析柱。 空柱是要洗干凈才行的，至于裝柱，最好還是有連接器，不然裝不實(shí)，如果有空隙效果就會(huì)差一點(diǎn)了。你說(shuō)的玻璃柱也不一定要玻璃柱，你用其它材質(zhì)的也行，如果是玻璃，用氫氧化鈉洗的時(shí)候會(huì)有輕微的反應(yīng)生成硅酸鈉，所以材質(zhì)最好選擇能耐受高pH值的。 DEAE短時(shí)間內(nèi)能耐受pH1-14，但要注意是短時(shí)間，最多沖洗2個(gè)柱床體積就要改變回去，最好是中性的。工作時(shí)候pH2-9，但考慮到蛋白質(zhì)過(guò)酸過(guò)堿會(huì)變性，所以最好是5-8，具體是多少還要看你的蛋白質(zhì)而定，最好是看看各個(gè)pH值下你的蛋白質(zhì)的半壽期。 填料的用量我覺(jué)得還是首先要看看你有多少填料，填料足夠了，你裝多大都行。至于摸索條件之類的，你就裝小的，5毫升就行，甚至1毫升也可以，這樣就能很快沖洗完一個(gè)柱床體積了。因?yàn)橐槐吨搀w積是不足以沖洗完全的，所以每做一個(gè)濃度都應(yīng)該沖洗多于一倍，我用5倍，柱床體積越小就越節(jié)省時(shí)間。 至于摸索完洗脫條件之后，就要用來(lái)分離制備樣品，這時(shí)候用柱床體積大的，有利于結(jié)合較多的蛋白質(zhì)，一次制備較多的蛋白質(zhì)。你可以裝個(gè)20毫升的，隨你了。 自己裝的層析柱如果接頭合適，那也能用蛋白質(zhì)純化儀的，那就不用裝小柱，直接裝大柱了，洗脫條件也不用摸索了，直接走0-100%氯化鈉連續(xù)線性梯度。 |
4樓2011-07-08 19:06:41
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