本帖產(chǎn)生 1 個(gè) BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看

當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖

暖木warm

金蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 2423.6
帖子: 985
在線: 101.9小時(shí)
蟲號(hào): 1005928

[交流] 蛋白過纖維素柱的過程

請(qǐng)問，蛋白過纖維素柱怎么確定纖維素的用量？怎么做小試來確定梯度？玻璃柱過柱子之前怎么洗？越詳細(xì)越好，新手不懂，感謝各位

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

315分 085602 求調(diào)劑已經(jīng)有3人回復(fù)
求調(diào)劑，一志愿鄭州大學(xué)材料與化工專碩，英二數(shù)二342分，求老師收留已經(jīng)有4人回復(fù)
285求調(diào)劑已經(jīng)有8人回復(fù)
324求調(diào)劑已經(jīng)有8人回復(fù)
一志愿華南師范大學(xué)-22408計(jì)算機(jī)-292分-求華南師范大學(xué)調(diào)劑已經(jīng)有4人回復(fù)
材料調(diào)劑已經(jīng)有9人回復(fù)
321求調(diào)劑已經(jīng)有12人回復(fù)
調(diào)劑求助已經(jīng)有4人回復(fù)
22408 266求調(diào)劑已經(jīng)有3人回復(fù)
266分，一志愿電氣工程，本科材料，求材料專業(yè)調(diào)劑已經(jīng)有4人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

多糖酶解 HPLC 去酶已經(jīng)有13人回復(fù)
關(guān)于多糖的提取和純化已經(jīng)有13人回復(fù)
β-糖苷酶表達(dá)可溶性蛋白很多，怎么就是沒有活性已經(jīng)有24人回復(fù)
羧甲基纖維素和DEAE纖維素分離蛋白有什么區(qū)別？已經(jīng)有4人回復(fù)
【求助/交流】如何高度純化蛋白，急急急已經(jīng)有15人回復(fù)
【求助】如何選擇手性分析柱已經(jīng)有4人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2011-07-07 20:16:23

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

專家顧問 (知名作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
amisking(金幣+6, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-08 20:07:43
暖木warm(金幣+3): 非常感謝 2011-07-08 21:57:34

如果是填料，說明書可能是沒有了。我這里有DEAE的說明書，我也用過這個(gè)層析柱。

空柱是要洗干凈才行的，至于裝柱，最好還是有連接器，不然裝不實(shí)，如果有空隙效果就會(huì)差一點(diǎn)了。你說的玻璃柱也不一定要玻璃柱，你用其它材質(zhì)的也行，如果是玻璃，用氫氧化鈉洗的時(shí)候會(huì)有輕微的反應(yīng)生成硅酸鈉，所以材質(zhì)最好選擇能耐受高pH值的。

DEAE短時(shí)間內(nèi)能耐受pH1-14，但要注意是短時(shí)間，最多沖洗2個(gè)柱床體積就要改變回去，最好是中性的。工作時(shí)候pH2-9，但考慮到蛋白質(zhì)過酸過堿會(huì)變性，所以最好是5-8，具體是多少還要看你的蛋白質(zhì)而定，最好是看看各個(gè)pH值下你的蛋白質(zhì)的半壽期。

填料的用量我覺得還是首先要看看你有多少填料，填料足夠了，你裝多大都行。至于摸索條件之類的，你就裝小的，5毫升就行，甚至1毫升也可以，這樣就能很快沖洗完一個(gè)柱床體積了。因?yàn)橐槐吨搀w積是不足以沖洗完全的，所以每做一個(gè)濃度都應(yīng)該沖洗多于一倍，我用5倍，柱床體積越小就越節(jié)省時(shí)間。

至于摸索完洗脫條件之后，就要用來分離制備樣品，這時(shí)候用柱床體積大的，有利于結(jié)合較多的蛋白質(zhì)，一次制備較多的蛋白質(zhì)。你可以裝個(gè)20毫升的，隨你了。

自己裝的層析柱如果接頭合適，那也能用蛋白質(zhì)純化儀的，那就不用裝小柱，直接裝大柱了，洗脫條件也不用摸索了，直接走0-100%氯化鈉連續(xù)線性梯度。

贊一下(2人)

回復(fù)此樓

4樓2011-07-08 19:06:41

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 4 個(gè)回答

冼亮淀粉酶

專家顧問 (知名作家)

★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
暖木warm(金幣+1): 恩，是的。求解答，謝謝 2011-07-08 08:47:57

DEAE纖維素陰離子柱？

自裝的？

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2011-07-08 02:07:09

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

yang0071

木蟲 (職業(yè)作家)

BioEPI: 2
應(yīng)助: 207 (大學(xué)生)
金幣: 1573.4
帖子: 4041
在線: 647.7小時(shí)
蟲號(hào): 50941

★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
暖木warm(金幣+4): 謝謝，因?yàn)槭切率�，不知道小試怎么做，能說一下具體步驟嗎？越詳細(xì)越好 2011-07-08 15:12:20

柱容量一般說明書上有，你自己算一下，開始先試3倍量。
小試用ep管作可以了，跟免疫沉淀類似；
洗柱，全新的玻璃柱，0.5% naoh 泡30min，水洗3遍，0.5% hcl 泡30min，水洗3遍。水只的是自來水，蒸餾水，去離子水。舊的話，可泡可不泡。
注意安全，雖然是弱酸弱堿，濺到也很難受的

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

3樓2011-07-08 11:33:48

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 266分，一志愿電氣工程，本科材料，求材料專業(yè)調(diào)劑 +4	哇呼哼呼哼 2026-04-02	4/200	2026-04-02 18:10 by zhyzzh
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +11	大饞小子 2026-03-28	11/550	2026-04-02 15:59 by yunlongyang
[考研] 372分材料與化工（085600）一志愿湖南大學(xué)求調(diào)劑 +4	藍(lán)箋片 2026-04-02	5/250	2026-04-02 15:44 by 不吃魚的貓
[考研] 能源動(dòng)力調(diào)劑 +3	不破不立0 2026-04-02	3/150	2026-04-02 12:46 by ffffjjjj
[考研] 085601一志愿中山大學(xué)深圳材料工程330求調(diào)劑 +8	pipiver 2026-03-30	8/400	2026-04-02 12:01 by ms629
[考研] 0856初試324分求調(diào)劑 +6	想上學(xué)求調(diào) 2026-04-01	6/300	2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑 +5	明仔· 2026-04-01	7/350	2026-04-02 11:17 by 鄒尉尉
[考研] 一志愿廈門大學(xué)化學(xué)工程（專碩）-數(shù)二英二406分-求調(diào)劑 +5	廈大化工 2026-04-01	5/250	2026-04-02 10:03 by jp9609
[考研] 266求調(diào)劑 +4	學(xué)員97LZgn 2026-04-02	4/200	2026-04-02 09:52 by yulian1987
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +13	Koxui 2026-03-28	13/650	2026-04-02 09:35 by 噠噠噠呱呱呱
[考研] 070300化學(xué)279求調(diào)劑 +15	哈哈哈^_^ 2026-03-31	17/850	2026-04-01 21:37 by 給你你注意休息
[考研] 調(diào)劑申請(qǐng) +8	張張張張zy 2026-03-31	9/450	2026-04-01 08:29 by zjbkx
[考研] 求調(diào)劑 +9	akdhjs 2026-03-31	10/500	2026-03-31 17:14 by zhyzzh
[考研] 315求調(diào)劑 +6	akie... 2026-03-28	7/350	2026-03-31 16:48 by asdfzly
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +13	辰沐5211314 2026-03-26	13/650	2026-03-31 14:37 by 記事本2026
[考研] 一志愿大連理工大學(xué)，機(jī)械工程學(xué)碩，341 +3	西瓜田的守望者 2026-03-30	3/150	2026-03-31 11:08 by asdfzly
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)調(diào)劑 +11	景隨風(fēng) 2026-03-29	16/800	2026-03-31 10:14 by herarysara
[考研] 105500藥學(xué)求調(diào)劑，一志愿山東大學(xué)藥學(xué)，348分 +3	gr哈哈哈 2026-03-28	3/150	2026-03-30 18:56 by 源_2020
[考研] 2026年華南師范大學(xué)歡迎化學(xué)，化工，生物，生醫(yī)工等專業(yè)優(yōu)秀學(xué)子加入！ +3	llss0711 2026-03-28	6/300	2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 283求調(diào)劑 +3	A child 2026-03-28	3/150	2026-03-28 15:41 by ms629