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悅迷008木蟲 (著名寫手)
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羧甲基纖維素和DEAE纖維素分離蛋白有什么區(qū)別?
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| 小弟在做蛋白質(zhì)分離純化實(shí)驗(yàn),需要用到羧甲基纖維素進(jìn)行離子交換柱層析分離,但能不能用DEAE纖維素代替羧甲基纖維素進(jìn)行分離純化?希望各位好心的師兄師姐幫忙解答一下,不勝感激! |
【分子生物】EPI帖 |

專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
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專家經(jīng)驗(yàn): +248 |
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這兩個(gè)填料雖然都是離子交換用的,但一個(gè)是弱陰一個(gè)是弱陽,效果不同,沒有一個(gè)能代替另一個(gè)的說法。 羧甲基纖維素是弱陽離子交換填料,要求使用時(shí)的pH值要低于目的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)起碼0.5個(gè)pH值單位,為了達(dá)到較好的分離效果,實(shí)際使用時(shí)最好是低于1個(gè)以上pH值單位。在低pH值下,有的不耐酸的雜質(zhì)蛋白質(zhì)會變性,屆時(shí)離心除去,可首先去除一部分雜質(zhì)蛋白質(zhì)。 DEAE纖維素是弱陰離子交換層析填料,要求使用時(shí)的pH值要高于目的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)起碼0.5個(gè)pH值單位,為了達(dá)到較好的分離效果,實(shí)際使用時(shí)最好是高于1個(gè)以上pH值單位。大多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)在6.0左右,可以耐受8.0,所以依據(jù)pH提高使得某些雜質(zhì)蛋白質(zhì)變性的做法多數(shù)情況下不可行。 這兩種填料的工作pH值不同,但都可以用氯化鈉來洗脫。交換基團(tuán)不同,分離效果也不同,可以先用一種來純化,得到初步純化的產(chǎn)物之后再用另一種來純化。因?yàn)橛行┑鞍踪|(zhì)不能耐受酸,所以我建議先用羧甲基纖維素弱陰離子交換層析,再用DEAE纖維素弱陽離子交換層析,產(chǎn)物的純度比單用一種時(shí)更高。 在對蛋白質(zhì)的破壞方面,弱交換填料比強(qiáng)交換填料好,有的蛋白質(zhì)用強(qiáng)離子交換來純化,蛋白質(zhì)結(jié)合再交換之后會損失很多活力,但是弱離子交換則損失的活力較少。但是弱離子交換的分辨率比強(qiáng)離子交換差一些。如果純化得不好,又有強(qiáng)離子交換的,就試一下吧。 |

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