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guoyongyue新蟲 (初入文壇)
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[求助]
DEAE-52纖維素柱求助 已有2人參與
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| 現(xiàn)在在做食用菌子實(shí)體多糖的分離純化,我用的是DEAE-52的纖維素柱,用0.05到0.5的NaCl 梯度洗脫,1.25ml/min,上樣量是1mg/ml 的多糖10ml,每管收集5ml,過了兩次,也有峰,但是純品太少,沒辦法富集,還想拿到純品,怎么辦呢? |
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多糖醇沉的時候確實(shí)有兩層上面漂浮的一層是膠體狀的,下面一層是沉淀。膠體狀的我沒做過,我做的是下面的沉淀。我有以下建議: 建議一:柱子的規(guī)格。如果想大量的制備,當(dāng)然是選擇稍稍大的柱子。直徑在2.0cm以上。 建議二:你上樣量。可以稍稍加大點(diǎn)多糖的上樣量。 建議三:多糖的濃度。你上樣上了10ml。盡量減小上樣體積,提高多糖濃度。 建議四:梯度洗脫的濃度選擇。0.05-0.5這個濃度,你是隨便選擇的。什么濃度是最適合的,是需要實(shí)驗依據(jù)的。你有兩種方案選擇:1、階段性梯度洗脫:洗脫液的濃度從0、到2mol/L,選擇適當(dāng)?shù)牟煌瑵舛,有低到高依次洗脫并分別收集。2、線性連續(xù)性梯度洗脫:洗脫濃度是從0-2mol/L,成線性、連續(xù)性洗脫,這種線性濃度你可以在去離子水中一邊接入柱子,一邊同時勻速加入高濃度的洗脫液2mol/L,同時不斷攪拌(磁力攪拌器),使溶液濃度從0慢慢逐步提高。 建議四:你要對以上收集的收集液,逐管或者隔管檢測多糖含量,從而來確定主峰的位置。以便選擇適當(dāng)?shù)南疵摑舛,從而?yōu)化實(shí)驗參數(shù)。 建議四:細(xì)心、耐心加毅力。 祝你試驗成功。 |
木蟲 (小有名氣)
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主管區(qū)長 (知名作家)
火星駐地球聯(lián)絡(luò)處主任科員
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專家經(jīng)驗: +199 |
| 非應(yīng)助,自己也是在學(xué)習(xí)中,DE52不耐壓,如果加大鹽離子濃度可以不?不梯度洗脫,直接用一較高鹽離子濃度洗脫液洗脫 |

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