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gruyclewee榮譽(yù)版主 (文壇精英)
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關(guān)于MRM方法測定血藥濃度時內(nèi)標(biāo)曲線的繪制問題 已有1人參與
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本人近來看了一些關(guān)于MRM測定血液、血漿或者尿液等人體液中藥物濃度的文獻(xiàn)。 采用的方法一般都是用LC-MS/MS的MRM模式進(jìn)行采集，然后一般都會加入內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正。 有一個問題一直都困惑著我，我看這些文章繪制標(biāo)準(zhǔn)校正曲線的時候有兩種方式： （1）一種是將測的藥物標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)加到不含該藥物的空白血漿/尿液中，然后用MRM采集數(shù)據(jù)，用藥物的峰面積對內(nèi)標(biāo)的峰面積之比vs藥物濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后計算其線性范圍等等。 （2）另外一種方式是要測的藥物標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)不加到不含該藥物的空白血漿/尿液中（即不加到基質(zhì)中），直接用水或者流動相溶解，然后用MRM采集數(shù)據(jù)，用藥物的峰面積對內(nèi)標(biāo)的峰面積之比vs藥物濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后計算其線性范圍等等。 兩種方法的不同之處就是做標(biāo)準(zhǔn)曲線的時候，需不需要將標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)加到基質(zhì)中，然后采集數(shù)據(jù)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 請問這兩種方法有什么不同？那一種更好？通常用的是哪種方法？ 謝謝！ [ Last edited by gruyclewee on 2013-12-3 at 11:17 ] |
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加內(nèi)標(biāo)的主要目的就是為了克服基質(zhì)干擾吧。 所以，在我看來，外標(biāo)和內(nèi)標(biāo)的區(qū)別在于加不加內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分析化學(xué)里面不就是這么定義的么？ 我上面提到的上個方法作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法都屬于內(nèi)標(biāo)法吧。但是可以說一個是標(biāo)準(zhǔn)加入，另外一個不是標(biāo)準(zhǔn)加入。 我的問題是，不在于內(nèi)標(biāo)外標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)加入法的問題。因為這兩種方法都是內(nèi)標(biāo)法。我想知道為什么有的用標(biāo)準(zhǔn)加入，有的不用標(biāo)準(zhǔn)加入。這兩種方法都是在測定血漿中藥物的文獻(xiàn)中看到的。 |
5樓2013-12-03 14:22:50
akosrios
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加內(nèi)標(biāo)無法克服基質(zhì)干擾。 內(nèi)標(biāo)主要用來校正進(jìn)樣量，汽化程度等影響因素。 標(biāo)加法法是用來克服基質(zhì)干擾的，假設(shè)基質(zhì)對樣品有一定比例吸附，就需要在標(biāo)樣里也加入基質(zhì)以平衡基質(zhì)吸附，而單純加內(nèi)標(biāo)是無法平衡這方面的影響的。 樓主提到的方法二，樣品是在基質(zhì)環(huán)境中，而標(biāo)樣是在水或者流動相中，這種情況下，如果基質(zhì)有吸附，無論是外標(biāo)還是內(nèi)標(biāo)，都無法準(zhǔn)確測定，而只能采用方法一 |
6樓2013-12-03 14:29:06
wyy080214
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
release53: 金幣+1, 辛苦了 2013-12-03 15:40:14
gruyclewee: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 感謝解答，謝謝！ 2013-12-04 00:28:51
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1、在常規(guī)實驗中，應(yīng)該使用基質(zhì)去配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，國外好多文獻(xiàn)都是用基質(zhì)去配的，不管加入內(nèi)標(biāo)是克服基質(zhì)效應(yīng)也罷，還是跟蹤回收率問題也罷，個人認(rèn)為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)更能真實的反應(yīng)樣品與儀器，與標(biāo)準(zhǔn)之間的關(guān)系。 2、好多中文文獻(xiàn)均使用標(biāo)準(zhǔn)溶液去繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，個人認(rèn)為這是儀器的標(biāo)準(zhǔn)曲線，反應(yīng)的是標(biāo)準(zhǔn)與儀器間的線性范圍，而與樣品關(guān)系不大。這個不推薦。如果解釋不清楚的話，可以參考儀器精密度和方法精密度之間的關(guān)系和差別。亂說一通，如有問題，請別見笑。  |
7樓2013-12-03 14:34:32
gruyclewee
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恩，我也贊同你的看法，在基質(zhì)中配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)該更能夠接近真實情況。 我看很多國外的文獻(xiàn)都是把標(biāo)樣加到不好待測物的基質(zhì)中繪制內(nèi)標(biāo)曲線。但是他們所測的藥物一般都是病人含有的，健康人血漿中是沒有的，所以他可以把待測的藥物標(biāo)準(zhǔn)品加到健康人的血漿中來模擬病人血漿中藥物的情況來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，這個固然很好，我非常理解。 但是我有個問題，比如血漿，如果我測的物質(zhì)本身在血漿中就是含有的，那就意味著我們并不能獲得不含該藥物的空白血漿，那么該怎么做呢？ |
8樓2013-12-03 15:03:52
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