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[交流] 單克隆抗體亞克隆的次數(shù)

想交流下單克隆抗體制備過程中的亞克隆次數(shù)：
1.如果第二次亞克隆，ELISA檢測單集落孔全為陽性，是否進(jìn)行第三次亞克隆。
進(jìn)行第三次亞克隆篩選雜交瘤細(xì)胞會(huì)更穩(wěn)定么，還是雜交瘤細(xì)胞容易丟失，細(xì)胞逐代養(yǎng)下去，感覺陽性株也是容易丟失的么？

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1樓 2013-12-04 14:20:13

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Endless100

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-04 18:22:17

最好還是進(jìn)行三次亞克隆，因?yàn)檫@也是篩選穩(wěn)定細(xì)胞株的過程

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2樓2013-12-04 17:31:40

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引用回帖:

2樓: Originally posted by Endless100 at 2013-12-04 17:31:40
最好還是進(jìn)行三次亞克隆，因?yàn)檫@也是篩選穩(wěn)定細(xì)胞株的過程

第二次亞克隆全部孔都為陽性，且單集落孔有40個(gè)，文獻(xiàn)上也說，如果穩(wěn)定進(jìn)行第三次亞克隆，但雜交瘤在培養(yǎng)的過程中也不是容易染色體丟失？有的時(shí)候感覺處理是矛盾的。我是二亞克隆全為陽性，也進(jìn)行三亞了，也是陽性，但不知道什么原因，三亞的細(xì)胞沒長起來，長著長著就飄了，然后，脫落，細(xì)胞萎縮死亡，先頭擔(dān)心是污染，但幾天細(xì)胞溶液上清沒有渾濁，鏡下也不像細(xì)菌污染。

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3樓2013-12-06 09:41:24

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我也正在做單抗，老板要求我做四次亞克隆才可以！

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4樓2013-12-17 16:14:35

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藍(lán)默兒: 金幣+1 2014-04-03 17:40:33

需要進(jìn)行第三次細(xì)胞亞克隆，這樣篩選出來的細(xì)胞株會(huì)更穩(wěn)定，一般都不會(huì)丟失陽性，已經(jīng)很穩(wěn)定

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5樓2014-04-03 16:34:51

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藍(lán)默兒: 金幣+1 2014-04-03 17:40:52
藍(lán)默兒: 金幣+1 2014-07-25 20:00:59

引用回帖:

3樓: Originally posted by 藍(lán)默兒 at 2013-12-06 09:41:24
第二次亞克隆全部孔都為陽性，且單集落孔有40個(gè)，文獻(xiàn)上也說，如果穩(wěn)定進(jìn)行第三次亞克隆，但雜交瘤在培養(yǎng)的過程中也不是容易染色體丟失？有的時(shí)候感覺處理是矛盾的。我是二亞克隆全為陽性，也進(jìn)行三亞了，也是陽性 ...

染菌分類好多，細(xì)胞上清液沒有渾濁，也有可能是支原體染菌，細(xì)胞液不會(huì)渾濁的，如果不想丟棄細(xì)胞也沒有辦法挽救細(xì)胞，建議你將目前生長不好的細(xì)胞注射小鼠體內(nèi)，最后再從小鼠腹腔里面收集細(xì)胞。

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6樓2014-04-03 16:39:32

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raohui

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請(qǐng)問你們亞克隆是怎樣具體操作的？我每次亞幾乎都是多克隆，單克隆太少，有什么方法可以高效的亞出單個(gè)單克隆嗎？請(qǐng)指教？

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7樓2014-07-25 14:00:27

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引用回帖:

7樓: Originally posted by raohui at 2014-07-25 14:00:27
請(qǐng)問你們亞克隆是怎樣具體操作的？我每次亞幾乎都是多克隆，單克隆太少，有什么方法可以高效的亞出單個(gè)單克隆嗎？請(qǐng)指教？

細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，取細(xì)胞懸液0.1ml加入0.9ml臺(tái)盼藍(lán)染液中，混勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)算細(xì)胞數(shù)目的公式為：每毫升細(xì)胞數(shù)=4個(gè)大方格細(xì)胞數(shù)×105/4；或每毫升細(xì)胞數(shù)=5個(gè)中方格細(xì)胞數(shù)×106/2，具體你可以再仔細(xì)查下

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8樓2014-07-25 20:23:20

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如果每孔細(xì)胞集落差不多大 OD都差不多一樣說明達(dá)到了真正的全陽如果沒有這樣建議繼續(xù)亞克隆會(huì)更穩(wěn)定不會(huì)丟失的

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9樓2015-12-25 14:46:16

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