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fxj33102013新蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白容易沉
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| 最近做了幾個金黃色葡萄球菌的蛋白,有2個是過完鎳柱就沉,有一個是換低鹽buffer時沉。上清中蛋白濃度很小,如果用上清過QFF或S200剩余的量明顯不夠篩晶體的。接下來不知道是重新截取片段還是嘗試換不同的buffer,ph嘗試。求高人指點! |

鐵蟲 (初入文壇)
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1 如果蛋白是可溶性表達,用lysis buf超聲后的上清過鎳柱我還沒有遇到過沉淀的情況,有一種可能就是超聲過猛,而蛋白本身不是真的可溶性表達 2 這種情況應(yīng)該比較常見,通常lysis buf 含0.5的NaCl, 之后純化時也應(yīng)保持稍高的鹽濃度進行。比如0.2M NaCl。 擔(dān)心不掛柱的話,可以將過鎳柱的蛋白先稀釋到不同鹽濃度,看看在哪個鹽濃度以上能穩(wěn)定,再繼續(xù)做離子交換。 希望對你有點幫助。 |

金蟲 (正式寫手)
不放棄的小鳥
| 應(yīng)該是蛋白對鹽離子濃度變化敏感 |

至尊木蟲 (文壇精英)
新蟲 (小有名氣)

新蟲 (小有名氣)

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