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fxj33102013新蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白容易沉
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| 最近做了幾個(gè)金黃色葡萄球菌的蛋白，有2個(gè)是過完鎳柱就沉，有一個(gè)是換低鹽buffer時(shí)沉。上清中蛋白濃度很小，如果用上清過QFF或S200剩余的量明顯不夠篩晶體的。接下來不知道是重新截取片段還是嘗試換不同的buffer，ph嘗試。求高人指點(diǎn)！ |
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recca1016
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【答案】應(yīng)助回帖
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fxj33102013: 金幣+50, ★★★很有幫助, 謝謝了，我試一下！ 2014-01-11 10:35:47
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fxj33102013: 金幣+50, ★★★很有幫助, 謝謝了，我試一下！ 2014-01-11 10:35:47
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1 如果蛋白是可溶性表達(dá)，用lysis buf超聲后的上清過鎳柱我還沒有遇到過沉淀的情況，有一種可能就是超聲過猛，而蛋白本身不是真的可溶性表達(dá) 2 這種情況應(yīng)該比較常見，通常lysis buf 含0.5的NaCl， 之后純化時(shí)也應(yīng)保持稍高的鹽濃度進(jìn)行。比如0.2M NaCl。 擔(dān)心不掛柱的話，可以將過鎳柱的蛋白先稀釋到不同鹽濃度，看看在哪個(gè)鹽濃度以上能穩(wěn)定，再繼續(xù)做離子交換。 希望對(duì)你有點(diǎn)幫助。 |
2樓2013-12-06 09:19:18
niushuaiji
金蟲 (正式寫手)
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| 應(yīng)該是蛋白對(duì)鹽離子濃度變化敏感 |
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fxj331020133樓2013-12-06 09:46:34
lihe131
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4樓2013-12-10 22:17:15
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5樓2014-01-11 10:37:56
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6樓2014-01-11 10:38:36
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