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574759350鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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pet-28b載體lacI缺失兩個(gè)堿基會(huì)導(dǎo)致什么結(jié)果
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| 在用pet-28b載體和BL21（DE3）宿主菌構(gòu)建工程菌之后，測(cè)序發(fā)現(xiàn)pet-28b質(zhì)粒上lacI基因缺失了兩個(gè)堿基，這與我的目的蛋白不表達(dá)有關(guān)系么？ |
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4樓2013-12-09 12:32:28
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【答案】應(yīng)助回帖
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574759350: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-12-09 16:56:08
574759350: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-12-09 16:56:08
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更正我上面錯(cuò)誤的說(shuō)法， 表達(dá)菌株BL21(DE3)上帶有l(wèi)acI基因，其表達(dá)的LacI蛋白在非誘導(dǎo)的條件下，既可以與T7 RNA polymerase前的lac UV5啟動(dòng)子后的operator O結(jié)合，也可以與pET28a載體T7啟動(dòng)子后的Operator O結(jié)合，從而在非誘導(dǎo)情況下阻遏目的基因表達(dá) 雖然pET-28a載體的LacI發(fā)生堿基缺失突變，由于細(xì)菌基因組本身仍能表達(dá)正常的LacI，所以總的來(lái)說(shuō)在非誘導(dǎo)情況下仍能阻遏蛋白表達(dá) 這兩個(gè)堿基的缺失與你的蛋白不表達(dá)無(wú)關(guān) |
5樓2013-12-09 14:35:21
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6樓2013-12-10 01:08:53
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BL21(DE3) F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5]) an E. coli B strain with DE3, a λ prophage carrying the T7 RNA polymerase gene and lacIq Transformed plasmids containing T7 promoter driven expression are repressed until IPTG induction of T7 RNA polymerase from a lac promoter. Derived from B834 (Wood, 1966) by transducing to Met+. See the original Studier paper or the summary in Methods in Enzymology for more details. Whole genome sequence available [3] |
7樓2013-12-10 15:00:37
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8樓2013-12-11 03:01:35
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9樓2013-12-11 03:24:28
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1.genotype里寫(xiě)得是wtlacI，介紹里才寫(xiě)得Iq 2.NCBI 里organism里選擇 Escherichia coli BL21(DE3) (taxid:469008) 用lacIq的promoter blast Query 1 GACACCATCGAATGGTGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAA 54 ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 748652 GACACCATCGAATGGCGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAA 748705 Query 1 GACACCATCGAATGGTGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAA 54 ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 337117 GACACCATCGAATGGCGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAA 337064 其中第一段是DE3integration 第二段是genome，其中-35區(qū)的 gtgcaa是LacIq promoter gcgcaa是wt，按照這個(gè)序列，在BL21 de3里面是兩段wtlacI, 當(dāng)然我自己沒(méi)有做過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證這個(gè)。 |
10樓2013-12-11 07:05:49
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