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張爽00100金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于雙酶切 已有1人參與
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| 最近在做兩個(gè)雙酶切，NcoI和BamH I;BamH I和XhoI ;都是MBI的，雙酶切的buffer分別是1*tango和2*tango，和酶一起的都是10*buffer tango，要稀釋嗎？還有雙酶切的體系一般是怎樣的，之前師姐實(shí)驗(yàn)做的都是50ul：酶各1ul、DNA 10ul、10*buffer 5ul 、ddH2O 33ul。但是做兩次都沒有做出來，希望各路大俠賜教。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2013-12-11 09:59:17
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kx444555: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2013-12-11 09:59:17
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首先你的反應(yīng)體系應(yīng)該是對(duì)的，沒有什么問題。建議你看一下這兩個(gè)雙酶切：NcoI和BamH I;BamH I和XhoI，每一種酶各自的buffer是什么，雙酶切時(shí)是否通用。例如BamH I和XhoI 這兩個(gè)酶Takara公司的分別是buffer K和buffer H，雙酶切時(shí)Takara公司建議使用1*buffer K。由于我沒有用過MBI的限制性內(nèi)切酶，不清楚MBI公司針對(duì)這幾種酶的buffer是什么，但是原理應(yīng)該是一樣的。所以建議你檢查一下所以的buffer是否合適。 另外，酶切時(shí)可以在50ul 反應(yīng)體系中加1ul的BSA，保護(hù)酶， 有利于酶切反應(yīng)。同時(shí)在酶切時(shí)建議每隔10min輕輕混勻一下，保證酶切充分。 如果實(shí)在不行就只好分開做單酶切了。 希望對(duì)你有幫助。  |
3樓2013-12-11 08:50:33
張爽00100
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4樓2013-12-11 08:54:36
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5樓2013-12-11 08:56:56
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6樓2013-12-11 09:13:55
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7樓2013-12-11 13:53:28
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8樓2013-12-12 15:27:57
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謝謝了 9樓2013-12-14 21:20:59
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