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福兜新蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR靈敏度試驗(yàn)，以克隆后質(zhì)粒為模板，質(zhì)粒倍比稀釋需要注意些什么問題呢 請高手指教 已有1人參與
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| PCR目的基因克隆到質(zhì)粒上，以該質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，現(xiàn)在做靈敏度試驗(yàn)，質(zhì)粒倍比稀釋（ddH2O稀釋）為模板，為什么倍比稀釋的質(zhì)粒PCR產(chǎn)物電泳后，條帶沒有逐漸變淡的趨勢呢？是我質(zhì)粒倍比稀釋有問題嗎？質(zhì)粒倍比稀釋需要注意些什么問題呢？請高手指教 |
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zilinweizhu
銀蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-12 15:33:52
福兜: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-12-12 19:07:37
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| PCR是指數(shù)擴(kuò)增，在20循環(huán)作用就基本趨近飽和，稀釋的質(zhì)粒在擴(kuò)增達(dá)到飽和時(shí)，產(chǎn)物是沒有多大差別的，你可以看一下PCR反應(yīng)的指數(shù)增長曲線，選擇一個(gè)合適的循環(huán)數(shù)吧，光靠稀釋是不能比較出差別，或者你可以參考熒光定量的方法實(shí)時(shí)監(jiān)測也行 |
2樓2013-12-12 12:30:54
福兜
新蟲 (小有名氣)
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3樓2013-12-12 19:07:53
胖嘿嘿
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- 專業(yè): 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)
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您好，請問這個(gè)問題您結(jié)局了嗎？我最近也比較糾結(jié)不同濃度質(zhì)粒PCR后跑膠結(jié)果差不多，謝謝啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-04-07 13:36:24
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