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1056336909銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于DNA堿基配對(duì)反應(yīng)的條件 已有2人參與
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| 有沒有哪位大神知道單鏈DNA通過堿基配對(duì)反應(yīng)形成雙鏈的實(shí)驗(yàn)條件，比如溫度、時(shí)間、緩沖液等，最好提供一些資料，感激不盡。PS：最好再提供一下雙鏈DNA解鏈時(shí)的實(shí)驗(yàn)條件，thanks again. |
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2樓2013-12-13 11:08:37
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如果你要讓兩條單鏈DNA配對(duì)成為雙鏈DNA，這不涉及化學(xué)反應(yīng)，也不涉及PCR的問題。按摩爾比1:1混好了，95度加熱十分鐘，然后緩慢降溫到室溫即可，緩沖液隨意，條件別太極端就行。 相應(yīng)的，如果你要讓雙鏈DNA解鏈，95度加熱十分鐘就行，但是溫度一旦降低，就會(huì)又回去了。 |
4樓2013-12-13 11:59:51
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單鏈DNA是否自身配對(duì)，取決于其堿基序列和長(zhǎng)度。如果單鏈DNA序列里有互補(bǔ)的區(qū)間，并且長(zhǎng)度也可以容忍其自身配對(duì)所產(chǎn)生的張力，就會(huì)發(fā)生自配對(duì)。比如舉個(gè)粗糙的例子，AAGGCCTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNAAGGCCTT，兩端可能就會(huì)發(fā)生配對(duì)。 之所以要先加熱到95度，就是希望單鏈DNA自身的氫鍵，離子鍵等等全部被打破，繼而在緩慢降溫的情況下，與另一單鏈DNA形成雙鏈DNA，降溫過程一定要緩慢，嚴(yán)禁冷激，否則會(huì)發(fā)生非特異性的配對(duì)。所以通常用單鏈DNA制備雙鏈DNA時(shí)，保險(xiǎn)起見，加熱到95度這個(gè)過程是不省略的，至少我看到的文獻(xiàn)都是如此，而且這個(gè)過程也并不繁瑣，有個(gè)加熱塊就行了，沒必要省略。 |
6樓2013-12-13 13:09:10
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