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s6120610021銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
纖維素酶活求解惑 已有1人參與
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我在國藥集團(tuán)買的纖維素酶，上面寫的酶活大于等于15000U/g 我算了一下那1mg應(yīng)該大于等于15u，我用16.9g纖維素酶配制5ml溶液，那按照我稀釋的濃度1ml里面應(yīng)該有3mg多酶計(jì)算的酶活應(yīng)該是30-40，但是我按照下面方法計(jì)算出的酶活為3.388U/ml 請各位幫忙解惑，謝謝大家！ 方法：我用16.9g纖維素酶配制5ml溶液，之后取0.5ml加1.5ml檸檬酸緩沖溶液，1*6cm濾紙，50℃下60min，之后加3mlDNS，煮沸5min，之后取200微升，加2.5ml去離子水，測吸光度0.212，將吸光度帶入我測得葡萄糖公式得葡萄糖0.01255mg/ml,之后帶入酶活公式X=A*l/0.5*n得3.388U/ml,總感覺測得酶活過低，我是這樣算的0.01255*2*135 135是稀釋倍數(shù)，我是這樣算的，一開始0.5ml酶液加1.5緩沖液最后加3mlDNS相當(dāng)稀釋10倍，之后取200微升加2.5ml水相當(dāng)稀釋13.5倍，最后得總稀釋135倍 |
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s6120610021
銅蟲 (小有名氣)
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2樓2013-12-18 15:08:11
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s6120610021
銅蟲 (小有名氣)
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4樓2013-12-19 21:48:48
luwei13566
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
s6120610021: 金幣+10, ★★★很有幫助, 16.9mg寫錯了 2013-12-20 09:10:09
laozuzunzhe: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助！ 2013-12-20 22:07:51
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買來的纖維素酶標(biāo)注的酶活并不一定是以濾紙為底物測得，你用1%的羧甲基纖維素鈉做底物再測一次酶活試試~~。 還有就是你用5ml去溶解16.9g的酶，這能溶解嗎~，我感覺溶解將近20g的酶，至少也得100ml吧。。。，還有煮沸那一步，你再多煮5分鐘試試。 |
5樓2013-12-20 00:11:24
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