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season131124鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
多糖的分步醇沉 已有2人參與
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本人最近想用40%、60%、80%乙醇分步沉淀多糖，看文獻中介紹醇沉前多糖溶液濃度最好是2%—5%，我想問一下，如果我的多糖經(jīng)過脫蛋白后得到的濃縮液，不想冷凍干燥的話，該怎么確定醇沉前的多糖濃度呢？ 一般分步醇沉的操作是不是先將多糖溶液調(diào)整到合適濃度后，加入乙醇，使體系中乙醇終濃度是40%，4℃過夜后，抽濾得到多糖沉淀，然后將上清液繼續(xù)加入乙醇，使體系中乙醇終濃度達到60%，一般怎么計算要加入的乙醇體積呢？在計算的過程中要不要減掉前面加入的乙醇的體積？ 請問一般做分步醇沉的得率怎么樣？會不會出現(xiàn)某一個濃度乙醇沉淀的多糖特別多，另一個特別少呢？ 請各位大神賜教，本人將感激不盡~~~~ |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1、你可以取少量的濃縮液去做冷凍干燥，不干燥成固體測溶液中多糖的濃度有點麻煩，首先你得摸清楚你的濃縮液稀釋到多少倍后用硫酸苯酚法測得的吸光度在0.3~0.7之間，然后再配相應(yīng)濃度的葡萄糖溶液。 2、你說的就是分步醇沉的方法，測乙醇濃度可以用酒精計，或者自己算，自己算你得先清楚你所用的乙醇的濃度，無水乙醇好算一點，95%的乙醇稍微麻煩些，但都不是問題。料液中乙醇的終濃度 C=加入乙醇前溶液體積V1*加入乙醇前溶液乙醇濃度C1+所加入的乙醇體積V2*所加入的乙醇濃度C2/V1+V2，那按這個公式就能算出你想要的東西。 3、多糖是由不同數(shù)量的單糖按不同的序列聚合起來的，分子量分布很廣，而分子量與多糖的溶解性密切相關(guān)，所以分步醇沉出來的多糖肯定會有多有少，這是很正常的現(xiàn)象。 |
2樓2013-12-19 13:55:17
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