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season131124鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
多糖的分步醇沉 已有2人參與
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本人最近想用40%、60%、80%乙醇分步沉淀多糖，看文獻(xiàn)中介紹醇沉前多糖溶液濃度最好是2%—5%，我想問(wèn)一下，如果我的多糖經(jīng)過(guò)脫蛋白后得到的濃縮液，不想冷凍干燥的話，該怎么確定醇沉前的多糖濃度呢？ 一般分步醇沉的操作是不是先將多糖溶液調(diào)整到合適濃度后，加入乙醇，使體系中乙醇終濃度是40%，4℃過(guò)夜后，抽濾得到多糖沉淀，然后將上清液繼續(xù)加入乙醇，使體系中乙醇終濃度達(dá)到60%，一般怎么計(jì)算要加入的乙醇體積呢？在計(jì)算的過(guò)程中要不要減掉前面加入的乙醇的體積？ 請(qǐng)問(wèn)一般做分步醇沉的得率怎么樣？會(huì)不會(huì)出現(xiàn)某一個(gè)濃度乙醇沉淀的多糖特別多，另一個(gè)特別少呢？ 請(qǐng)各位大神賜教，本人將感激不盡~~~~ |
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小糊涂蟲蟲
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9樓2015-01-30 21:52:42
pjn403403
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1、你可以取少量的濃縮液去做冷凍干燥，不干燥成固體測(cè)溶液中多糖的濃度有點(diǎn)麻煩，首先你得摸清楚你的濃縮液稀釋到多少倍后用硫酸苯酚法測(cè)得的吸光度在0.3~0.7之間，然后再配相應(yīng)濃度的葡萄糖溶液。 2、你說(shuō)的就是分步醇沉的方法，測(cè)乙醇濃度可以用酒精計(jì)，或者自己算，自己算你得先清楚你所用的乙醇的濃度，無(wú)水乙醇好算一點(diǎn)，95%的乙醇稍微麻煩些，但都不是問(wèn)題。料液中乙醇的終濃度 C=加入乙醇前溶液體積V1*加入乙醇前溶液乙醇濃度C1+所加入的乙醇體積V2*所加入的乙醇濃度C2/V1+V2，那按這個(gè)公式就能算出你想要的東西。 3、多糖是由不同數(shù)量的單糖按不同的序列聚合起來(lái)的，分子量分布很廣，而分子量與多糖的溶解性密切相關(guān)，所以分步醇沉出來(lái)的多糖肯定會(huì)有多有少，這是很正常的現(xiàn)象。 |
2樓2013-12-19 13:55:17
season131124
鐵蟲 (小有名氣)
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3樓2013-12-19 15:18:07
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4樓2013-12-19 16:27:39
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