 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2347 | 回復(fù): 10 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
fengmx2010木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
利用gateway載體做RNAi和overexpression出現(xiàn)的問題，懂質(zhì)粒構(gòu)造的進(jìn)！��！ 已有3人參與
|
|
|
大家好，我現(xiàn)在想通過gateway技術(shù)構(gòu)建一種基因的RNAi和Overexpression表達(dá)載體。Destination plasmid是從國(guó)外購(gòu)買的，這兩種載體的圖譜如下。 我已經(jīng)將目的基因通過帶有attB1和attB2位點(diǎn)的引物克隆得到了。BP反應(yīng)和LR反應(yīng)已經(jīng)做完了，依據(jù)致死基因和T-DNA外面鏈霉素抗性以及酶切驗(yàn)證，三個(gè)把關(guān)，我感覺目的基因已經(jīng)導(dǎo)入到正確位置了。 現(xiàn)在的問題是，我將純化好的質(zhì)粒想導(dǎo)入發(fā)根農(nóng)桿菌中，選擇了A4（帶有利福平抗性）和AT15834野生型（無任何抗生素抗性）兩種菌株�？墒窃趺匆埠Y不到陽性克隆，要么是污染，要么是什么都不長(zhǎng)！我用的是鏈霉素（100ug/ml）和利福平（50ug/ml）平板，不知道是不是鏈霉素抗性基因不能在農(nóng)桿菌中表達(dá)��？卡那抗性能在農(nóng)桿菌中表達(dá)嗎？?jī)?nèi)含子之間的CmR又是在哪里表達(dá)的呢？我查了文獻(xiàn)，但是還是一頭霧水。關(guān)鍵是，有沒有一種方法，可以從基因序列直接推理出它在某種菌內(nèi)的表達(dá)情況？？ overexpression用 RNAi用，內(nèi)含子之間有一cat基因，LB RB之間有一kana抗性基因。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有222人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
fengmx2010
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 4659.4
- 紅花: 2
- 帖子: 1353
- 在線: 234.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1227370
- 注冊(cè): 2011-03-09
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物化學(xué)保護(hù)
9樓2014-01-01 17:17:29
Huobol
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 14473.1
- 散金: 70
- 紅花: 7
- 帖子: 1274
- 在線: 162.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 1214385
- 注冊(cè): 2011-02-26
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
2樓2013-12-19 22:48:33
3樓2013-12-24 20:49:58
fengmx2010
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 4659.4
- 紅花: 2
- 帖子: 1353
- 在線: 234.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1227370
- 注冊(cè): 2011-03-09
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物化學(xué)保護(hù)
4樓2013-12-30 21:35:20
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600 材料與化工 329分求調(diào)劑 +10 | Mr. Z 2026-03-25 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +10 | 北道巷 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收 +9 | 天天好運(yùn)來上岸?/a> 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求調(diào)劑 +5 | 0857求調(diào)劑. 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑 +7 | 芋泥小鈴鐺 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703 調(diào)劑 306分 一志愿211 +4 | 26要上岸 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 394求調(diào)劑 +3 | 好事多磨靜候佳?/a> 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑（080500） +4 | A child 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +5 | 求求讓我有書讀?/a> 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個(gè)好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 314求調(diào)劑 +3 | 溪云珂 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 李嘉圖·S·路 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑323材料與化工 +7 | 1124361 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +6 | 田洪有 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +6 | Koxui 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] B區(qū)考研調(diào)劑 +4 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4 | allen-yin 2026-03-23 | 6/300 |
|