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[求助]
白芨的根部內(nèi)生真菌分離 已有3人參與
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各位同仁，這幾天我在做白芨根部的內(nèi)生真菌分離。分了快一個月了，還沒分出來。 用的是PDA培養(yǎng)基，消毒時間除了酒精30s外，分別用了0.1%升汞2min、3min。4min、5min。死活啥都不長。 我都快哭了，現(xiàn)在都研二了，做不出還怎么畢業(yè)呀。白芨根看起來和生姜差不多。大家給個合適的消毒方法�。�！ 不知道是不是升汞把內(nèi)生真菌殺死了，我又想用10%次氯酸鈉10min試下。煩死了。 |
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laozuzunzhe: 金幣+5, good！ 2013-12-23 10:25:07
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建議有以下幾個: 1. 請在你的1000mLPDA的配方中加入KH2PO4 3g; MgSO4 1.5g; 維生素B1: 10mg后再試試。因為PDA配方有兩種，一種是綜合性的，一種是普通的(主要成分就是馬鈴薯和葡萄糖)。綜合性配方還是我上大學(xué)時我的老師教給我們的，比普通配方好。 2. 你在分離過程中的所有的器皿(如鑷子、培養(yǎng)皿、燒杯、剪刀、解剖刀、棉球等)全部高壓蒸汽滅菌，60攝氏度干燥后放入超凈工作臺，紫外燈照射殺菌后才能從包扎中取出來用。 3. 你的手在操作前一定要用75%酒精擦遍(關(guān)鍵)。 4. 白芨根部表面消毒時，只用75%酒精擦拭表面，不要浸泡。(消毒方法一) 5. 白芨根部表面消毒時，用75%酒精擦拭表面后，用0.1%升汞棉球擦拭表面，不要浸泡。(消毒方法二) 6. 用于分離的白芨根不能有傷口(關(guān)鍵)，2端的斷口用上述消毒劑擦拭后，立即用無菌刀切棄。 消毒方法一和消毒方法二可以對比使用。我做過其它植物內(nèi)生菌的分離以及多種植物內(nèi)部組織分離，全部用的這樣的方法，都能成功。但是我沒有做過白芨根部內(nèi)生菌的分離，所以我不能確定這方法是否對你有效，但你可以試試。另外，如果你所取的白芨根本身就沒有內(nèi)生菌，那你怎么分離都分不到的，不過這是我的看法，因為我畢竟對白芨這種植物不了解。 另外，對你有一個小的請求，就是: 你能否成功都反饋給我你成功與否的信息，好嗎? 希望你能夠成功! |
2樓2013-12-22 07:41:52
13樓2015-07-10 09:00:08
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【答案】應(yīng)助回帖
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1.取到白芨根后，自然晾干，用干紗布將表面擦凈，不要用酒精、升汞，次氯酸鈉這些溶液浸泡消毒，會滲進(jìn)去殺死內(nèi)生菌的。 2.分離時，手術(shù)刀火焰滅菌后從根表面一層一層地削，每削一刀都火焰滅菌一下，直到削到里面"干凈"的部分，切取一小塊，接入PDA上。 3.純化。如果培養(yǎng)出現(xiàn)細(xì)菌、酵母、或多個真菌菌落，則需進(jìn)行多次純化，獲得純菌株，最后鏡檢確認(rèn)一下。 這其實就是一個考驗手法的操作，多做幾次就行。食藥用菌工作者經(jīng)常對金針菇、北蟲草、野生菌、菇木進(jìn)行分離，難度也不小，熟能生巧，多做幾次就出來了，技術(shù)都是練出來的。祝你好運！ |
15樓2016-07-04 18:59:26
tazhongren
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16樓2016-07-06 00:13:17
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18樓2016-08-26 09:52:03
3樓2013-12-22 10:46:54
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可以，我已經(jīng)將我的所有的經(jīng)驗都寫進(jìn)了給您的回復(fù)，您先去做做看能否成功。一般的真菌在一個星期的培養(yǎng)中可以看到是否生長的結(jié)果，所以您先趕緊抓緊時間做一下，看能否成功�？傊�，請您記住一個原則，就是既要表面滅菌徹底，不能污染，也不能將根內(nèi)部的菌殺死了(0.1%的升汞殺菌力極強，這我們做過實驗)。如果這些都做得很好了，只要有內(nèi)生菌，是肯定分離得到菌的。如果還是分離不到菌，那就是您的白芨的根內(nèi)部可能沒有內(nèi)生菌了。如果您還有什么問題，盡可以給我留言。不過您先做做吧，光犯愁、著急沒有用呀!您說是不是? |
4樓2013-12-23 15:17:54
5樓2013-12-23 16:19:49
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您昨天做的，如果有真菌的話，真菌從白芨到您配制的培養(yǎng)基因為前后生長環(huán)境不同，可能要兩三天或更長一些的時間才能看到生長。您除了注意操作方法上既不要污染雜菌，又要保證真菌生長外，您還要考慮您分離的真菌是否有什么特別。您決定從白芨中分離真菌，一定是看到有報道才這么做，而且一定是這真菌有意義您才做。所以建議您一定要查到原始的文獻(xiàn)，要把有關(guān)白芨內(nèi)生真菌的英文文獻(xiàn)盡量都查到，看前人用的什么培養(yǎng)基、什么培養(yǎng)條件，分離方法是否有什么特別之處等�？傊�，建議您要吃透英文文獻(xiàn)的內(nèi)容，否則就可能要走很多的彎路。因為我不懂白芨，也不做有關(guān)它的工作，我就只能在您等待結(jié)果的過程中給您提這樣的建議。 |
6樓2013-12-23 23:09:42
7樓2013-12-24 22:25:48
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9樓2013-12-25 16:25:22
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我現(xiàn)在理解您說的"褐變"是白芨內(nèi)部組織褐變，而不是長出了菌，不知道對不對? 因為我做的植物組織不發(fā)生褐變。這樣看來您用的白芨內(nèi)部組織似乎是沒有內(nèi)生菌。建議于下: 既然沒有污染，繼續(xù)培養(yǎng)至一星期，看能否長菌；同時，您想辦法根據(jù)您的課題找到有內(nèi)生菌的白芨繼續(xù)分離，但是怎么辨認(rèn)白芨是否有內(nèi)生菌，因為我不了解，所以我就不懂了。 反正您都已經(jīng)分離了，建議還是繼續(xù)培養(yǎng)現(xiàn)有的分離組織，一星期后看有菌沒有。 |
10樓2013-12-25 16:57:04
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