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[求助]
白芨的根部?jī)?nèi)生真菌分離 已有3人參與
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各位同仁，這幾天我在做白芨根部的內(nèi)生真菌分離。分了快一個(gè)月了，還沒(méi)分出來(lái)。 用的是PDA培養(yǎng)基，消毒時(shí)間除了酒精30s外，分別用了0.1%升汞2min、3min。4min、5min。死活啥都不長(zhǎng)。 我都快哭了，現(xiàn)在都研二了，做不出還怎么畢業(yè)呀。白芨根看起來(lái)和生姜差不多。大家給個(gè)合適的消毒方法�。�！ 不知道是不是升汞把內(nèi)生真菌殺死了，我又想用10%次氯酸鈉10min試下。煩死了。 |
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9樓2013-12-25 16:25:22
xqxqxhxh1
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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amisking: 回帖置頂 2014-01-06 18:56:53
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amisking: 回帖置頂 2014-01-06 18:56:53
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建議有以下幾個(gè): 1. 請(qǐng)?jiān)谀愕?000mLPDA的配方中加入KH2PO4 3g; MgSO4 1.5g; 維生素B1: 10mg后再試試。因?yàn)镻DA配方有兩種，一種是綜合性的，一種是普通的(主要成分就是馬鈴薯和葡萄糖)。綜合性配方還是我上大學(xué)時(shí)我的老師教給我們的，比普通配方好。 2. 你在分離過(guò)程中的所有的器皿(如鑷子、培養(yǎng)皿、燒杯、剪刀、解剖刀、棉球等)全部高壓蒸汽滅菌，60攝氏度干燥后放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射殺菌后才能從包扎中取出來(lái)用。 3. 你的手在操作前一定要用75%酒精擦遍(關(guān)鍵)。 4. 白芨根部表面消毒時(shí)，只用75%酒精擦拭表面，不要浸泡。(消毒方法一) 5. 白芨根部表面消毒時(shí)，用75%酒精擦拭表面后，用0.1%升汞棉球擦拭表面，不要浸泡。(消毒方法二) 6. 用于分離的白芨根不能有傷口(關(guān)鍵)，2端的斷口用上述消毒劑擦拭后，立即用無(wú)菌刀切棄。 消毒方法一和消毒方法二可以對(duì)比使用。我做過(guò)其它植物內(nèi)生菌的分離以及多種植物內(nèi)部組織分離，全部用的這樣的方法，都能成功。但是我沒(méi)有做過(guò)白芨根部?jī)?nèi)生菌的分離，所以我不能確定這方法是否對(duì)你有效，但你可以試試。另外，如果你所取的白芨根本身就沒(méi)有內(nèi)生菌，那你怎么分離都分不到的，不過(guò)這是我的看法，因?yàn)槲耶吘箤?duì)白芨這種植物不了解。 另外，對(duì)你有一個(gè)小的請(qǐng)求，就是: 你能否成功都反饋給我你成功與否的信息，好嗎? 希望你能夠成功! |
2樓2013-12-22 07:41:52
3樓2013-12-22 10:46:54
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【答案】應(yīng)助回帖
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可以，我已經(jīng)將我的所有的經(jīng)驗(yàn)都寫(xiě)進(jìn)了給您的回復(fù)，您先去做做看能否成功。一般的真菌在一個(gè)星期的培養(yǎng)中可以看到是否生長(zhǎng)的結(jié)果，所以您先趕緊抓緊時(shí)間做一下，看能否成功。總之，請(qǐng)您記住一個(gè)原則，就是既要表面滅菌徹底，不能污染，也不能將根內(nèi)部的菌殺死了(0.1%的升汞殺菌力極強(qiáng)，這我們做過(guò)實(shí)驗(yàn))。如果這些都做得很好了，只要有內(nèi)生菌，是肯定分離得到菌的。如果還是分離不到菌，那就是您的白芨的根內(nèi)部可能沒(méi)有內(nèi)生菌了。如果您還有什么問(wèn)題，盡可以給我留言。不過(guò)您先做做吧，光犯愁、著急沒(méi)有用呀!您說(shuō)是不是? |
4樓2013-12-23 15:17:54
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