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刺芹側(cè)耳鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
DNS法測(cè)還原糖-----樣品顏色與對(duì)照顏色差不多，什么原因 已有1人參與
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最近在做杏鮑菇栽培料中CMC酶活測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用DNS顯色后，對(duì)照（酶已失活）和處理的顏色深淺差不多，有沒(méi)有人遇到和我一樣的情況？什么原因��？ 具體過(guò)程如下： 粗酶液制備：取培養(yǎng)料10g，加蒸餾水100ml，4-6度浸提過(guò)夜，過(guò)濾后得上清液。 底物：CMC-Na，0.5% No. Ck-6 6-1 粗酶液（ml） 2 2 沸水煮10min 是 否 CMC-Na（ml） 3 3 40度保溫30min，取出水浴15min，得酶液反應(yīng)液 No. 0 1 2 3 4 5 Ck-6 6-1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.5 0.5 水（ml） 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.5 0.5 DNS（ml） 2 2 2 2 2 2 2 2 混勻水浴加熱5min，取出冷卻，定容至25ml，測(cè)吸光度 以上是我實(shí)驗(yàn)的整個(gè)過(guò)程，結(jié)果出來(lái)后，理論上應(yīng)該是6-1的顏色要比Ck-6的顏色深，可是顯色后，兩個(gè)顏色機(jī)會(huì)一樣，肉眼分辨不出來(lái)， 而且CK-6加DNS也顯色了。。。。。 我分析有可能有以下原因：1、樣品中的酶濃度的確很低；2、樣品中本來(lái)就有其他別的和DNS反應(yīng)后顯色的物質(zhì)，所以顯色后對(duì)照和處理顏色差不多。 我想把酶液反應(yīng)的時(shí)間延長(zhǎng)一點(diǎn)，比如從30min延長(zhǎng)到1h，2h，這樣就可以加大顯色后顏色的對(duì)比，不知道這樣可行不？有沒(méi)有誰(shuí)也遇到和我一樣的情況��？謝謝！ 右邊是對(duì)照.jpg |
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2樓2014-03-02 17:32:09
刺芹側(cè)耳
鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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3樓2014-03-03 07:55:45
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