 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 9434 | 回復(fù): 29 | ||
[求助]
細(xì)菌質(zhì)粒提取濃度太低求助 已有8人參與
|
||
|
我質(zhì)粒提取已經(jīng)好幾次啦，每次提取出來(lái)濃度都是很低，我這是低拷貝質(zhì)粒，想提取出質(zhì)粒做轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，求大俠指導(dǎo)一下并幫我分析一下為什么我提取的質(zhì)粒跑電泳結(jié)果顯示濃度太低？ 我曾經(jīng)加大過(guò)菌量可是結(jié)果卻提不出來(lái)，我的操作步驟都是嚴(yán)格按照天根小量中提試劑盒的說(shuō)明書(shū)上來(lái)的，求高人指導(dǎo)下奧。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有167人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn)
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 酚氯仿法提取DNA的原理
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 求助！怎樣用試劑盒提取用大腸桿菌轉(zhuǎn)化了的質(zhì)粒DNA，100ul溶液中含30-50ug
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 菌液檢測(cè)時(shí)公司說(shuō)濃度太低，檢測(cè)如圖，要不要重新做？？？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 如何提高PET-28a質(zhì)粒提取濃度？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 質(zhì)粒濃度很低 無(wú)法測(cè)序 求挽救措施
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 搖的轉(zhuǎn)化到大腸桿菌的質(zhì)粒有沉淀
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 做單克隆測(cè)序是菌液好還是菌液PCR后測(cè)好?
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 搖菌小提質(zhì)粒的氨芐濃度問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 克隆提取質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果怎么跟大腸桿菌菌液測(cè)序結(jié)果序列比對(duì)差異很大啊？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 質(zhì)粒大提，搖菌時(shí)間過(guò)久對(duì)提取的質(zhì)粒有影響嗎？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 質(zhì)粒小提的試劑盒一個(gè)柱子最多能提多少ml的菌液啊
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 十萬(wàn)火急，重組質(zhì)粒酶切只有一條帶，測(cè)序有結(jié)果，但反復(fù)說(shuō)我質(zhì)粒濃度很低
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助】+ 提取的蛋白含量太低
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 提質(zhì)粒濃度太小，條帶不亮，有圖求真相
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 如何提取農(nóng)桿菌質(zhì)粒
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒濃度只有65ng/ul 能用來(lái)測(cè)序嗎
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒濃度達(dá)到多少 測(cè)序沒(méi)有問(wèn)題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】提取大腸桿菌質(zhì)粒時(shí)，所用的大腸桿菌菌液在4°C可以保存多長(zhǎng)時(shí)間?
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】我用菌液搖菌抽提質(zhì)粒濃度很低，請(qǐng)大家?guī)兔鉀Q下，為什么
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒提取的雜質(zhì)去除問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】細(xì)菌基因組DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否為細(xì)菌總DNA? 非?/a>
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
已經(jīng)有11人回復(fù)
yudaoqian88
至尊木蟲(chóng) (知名作家)
不良人
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 67 (初中生)
- 金幣: 25641
- 散金: 410
- 紅花: 34
- 沙發(fā): 15
- 帖子: 7647
- 在線(xiàn): 966.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1430329
- 注冊(cè): 2011-10-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 作物種質(zhì)資源與遺傳育種學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+5, 鼓勵(lì)交流 2013-12-24 08:21:05
jsxzzxj: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-12-24 09:25:15
gyesang: 回帖置頂 2014-03-28 16:39:44
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+5, 鼓勵(lì)交流 2013-12-24 08:21:05
jsxzzxj: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-12-24 09:25:15
gyesang: 回帖置頂 2014-03-28 16:39:44
|
質(zhì)粒提取數(shù)量少，只是質(zhì)�？截悢�(shù)低，裂解的菌液量少或者不充分，柱子回收效率不高的問(wèn)題！ 有時(shí)候按照正規(guī)操作提取質(zhì)粒，也有提不出來(lái)的現(xiàn)象是，可能是質(zhì)粒丟失了-原因不知！ 樓主可以這樣： 1對(duì)凍存的原始菌液做抗性劃線(xiàn)培養(yǎng)，一來(lái)借助抗生素純化質(zhì)粒，二來(lái)也提高了菌活性液。 2隨機(jī)挑選幾個(gè)單克隆擴(kuò)搖，用報(bào)告基因或者啟動(dòng)子序列作為Pcr對(duì)象進(jìn)行檢測(cè)或者合適酶的酶切檢測(cè)驗(yàn)證-可以放后面做，一般都對(duì)！ 3最大限度地提高菌體活性，先對(duì)正確的克隆小管擴(kuò)搖，然后再抽取新鮮菌液再擴(kuò)搖！ 4注意培養(yǎng)條件，培養(yǎng)時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般8-12小時(shí)或15小時(shí)以?xún)?nèi)吧！ 5按比例加大樣試劑總量，提取過(guò)程注意幾個(gè)細(xì)節(jié)，比如緩慢混勻，裂解后靜止等！ 6用60度左右預(yù)熱的水洗脫，洗脫兩遍，注意水的用量。 7可以加多水洗脫后，利用抽真空法濃縮質(zhì)粒！ 8有些盒子對(duì)質(zhì)粒大小也有要求，應(yīng)細(xì)看說(shuō)明書(shū)！ [ 發(fā)自小木蟲(chóng)客戶(hù)端 ] |
7樓2013-12-24 04:38:06
lillian菲
銀蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 金幣: 1474.2
- 紅花: 3
- 帖子: 74
- 在線(xiàn): 29.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1642017
- 注冊(cè): 2012-02-25
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
10樓2013-12-24 09:28:33
txy8469393
木蟲(chóng) (小有名氣)
拿著掃把的研究僧
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 金幣: 3477.9
- 散金: 58
- 紅花: 16
- 帖子: 258
- 在線(xiàn): 117.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 217565
- 注冊(cè): 2006-03-12
- 專(zhuān)業(yè): 病原細(xì)菌與放線(xiàn)菌生物學(xué)
★ ★ ★
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-28 16:41:33
gyesang: 回帖置頂 2014-03-28 16:41:35
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-28 16:41:33
gyesang: 回帖置頂 2014-03-28 16:41:35
|
就是最普遍的堿法提取 溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0），加RNase。 配制方法：1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。在121℃高壓滅菌15min ，貯存于4℃。 溶液Ⅱ：0.2M NaOH，1% SDS。 配制方法：2M NaOH 1ml，10%SDS 1ml，加ddH2O至10ml。 溶液Ⅲ：醋酸鉀（KAc）緩沖液，pH 4.8。 配制方法：5M KAc 300ml，冰醋酸 57.5ml，加ddH2O至500ml。4℃保存?zhèn)溆谩?br /> 苯酚/氯仿/異戊醇（25：24：1） |
22樓2013-12-25 10:53:32
yudaoqian88
至尊木蟲(chóng) (知名作家)
不良人
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 67 (初中生)
- 金幣: 25641
- 散金: 410
- 紅花: 34
- 沙發(fā): 15
- 帖子: 7647
- 在線(xiàn): 966.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1430329
- 注冊(cè): 2011-10-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 作物種質(zhì)資源與遺傳育種學(xué)
25樓2014-01-16 10:39:38
zhl875891551
鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 368.3
- 散金: 315
- 帖子: 483
- 在線(xiàn): 116.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1151547
- 注冊(cè): 2010-11-20
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料
2樓2013-12-23 16:23:12
天貓?zhí)熵?/a>
銅蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 7 (幼兒園)
- 金幣: 60
- 帖子: 48
- 在線(xiàn): 15.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2862913
- 注冊(cè): 2013-12-11
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 分子與進(jìn)化生態(tài)學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-24 08:20:49
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-24 08:20:49
|
1、采用加富的培養(yǎng)基搖菌，如用超級(jí)肉湯培養(yǎng)基或直接將LB培養(yǎng)基中的酵母粉和蛋白胨加倍，仔細(xì)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的初始pH值至中性或微微偏堿性； 2、培養(yǎng)基中添加170ug/ml氯霉素適當(dāng)抑制菌體的增殖，促進(jìn)質(zhì)粒復(fù)制； 3、注意培養(yǎng)過(guò)程中的通氣狀態(tài)。 |
3樓2013-12-23 16:39:51
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線(xiàn): 456小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
4樓2013-12-24 02:18:27
dj04164
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.1
- 金幣: 2728.2
- 散金: 357
- 紅花: 7
- 帖子: 400
- 在線(xiàn): 152小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 687713
- 注冊(cè): 2009-01-04
- 專(zhuān)業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料
5樓2013-12-24 03:29:22
txy8469393
木蟲(chóng) (小有名氣)
拿著掃把的研究僧
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 金幣: 3477.9
- 散金: 58
- 紅花: 16
- 帖子: 258
- 在線(xiàn): 117.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 217565
- 注冊(cè): 2006-03-12
- 專(zhuān)業(yè): 病原細(xì)菌與放線(xiàn)菌生物學(xué)
6樓2013-12-24 03:40:24
sxxuan
金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- MolEPI: 4
- 應(yīng)助: 107 (高中生)
- 金幣: 3442.4
- 散金: 104
- 紅花: 17
- 帖子: 1478
- 在線(xiàn): 266.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 512865
- 注冊(cè): 2008-02-27
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-28 16:38:43
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-28 16:38:43
|
低拷貝的質(zhì)粒確實(shí) 不是很好提取，所以菌液量一般是加倍的。但是菌液加倍后，相應(yīng)地溶液I、II、III也應(yīng)該加倍。也可以是分成兩管菌來(lái)裂解，離心后上清加入到同一個(gè)純化柱。 其實(shí)你的目的只是質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的效率比連接產(chǎn)物要高，哪怕是濃度很低條帶很亮，也可以先試著轉(zhuǎn)化的，沒(méi)必要在提取這個(gè)問(wèn)題糾纏這么久 |
8樓2013-12-24 09:24:07
9樓2013-12-24 09:24:57
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 jsxzzxj 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +10 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 總分331 +3 | ZY-05 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +6 | 困于星晨 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +13 | z2839474511 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 有沒(méi)有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +4 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +6 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4 | 初識(shí)可樂(lè) 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 工科，求調(diào)劑 +3 | 我887 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600調(diào)劑求老師收留 +9 | jiaanl 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +6 | Liyouyumairs 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 一定有學(xué)上- 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +7 | 綠豆芹菜湯 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學(xué)學(xué)碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 152697 2026-03-12 | 4/200 |
|