 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (6072)
- >導(dǎo)師招生 (1258)
- >考研 (1119)
- >文獻(xiàn)求助 (491)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (302)
- >考博 (208)
- >休閑灌水 (185)
- >基金申請(qǐng) (183)
- >碩博家園 (140)
- >招聘信息布告欄 (108)
- >博后之家 (91)
- >綠色求助(高懸賞) (51)
- >論文投稿 (46)
- >找工作 (40)
- >SciFinder/Reaxys (26)
- >外文書籍求助 (19)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1917 | 回復(fù): 5 | ||
w_goodluck銅蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌-枯草芽胞桿菌 total RNA提取-問(wèn)題求助 已有1人參與
|
|
大家好，先說(shuō)下我是RNA方面新手，接觸時(shí)間不長(zhǎng)，在實(shí)驗(yàn)室中遇到了問(wèn)題，請(qǐng)求大家?guī)椭?br />
先簡(jiǎn)單說(shuō)下實(shí)驗(yàn)方案：研究對(duì)象是枯草芽胞桿菌，培養(yǎng)條件是41度，LB+20g/L葡萄糖，240rpm，當(dāng)OD=0.9-1.1之間時(shí)，采用invitrogen TRIzol Max Bacterial RNA Isolation Kit（附件為使用說(shuō)明書）來(lái)提取4株不同基因型的枯草芽胞桿菌的total RNA，菌液量為1ml或1.5ml。total RNA是準(zhǔn)備用來(lái)進(jìn)行RNA-SEQ測(cè)序(illumia Hiseq2000平臺(tái)），做基因差異表達(dá)分析的。 問(wèn)1：該試劑盒其實(shí)只包括兩種試劑，一種為Max Bacterial Enhancement Reagent，另一種為 TRlzol@ Reagent。該試劑盒有人用過(guò)么？第一種試劑Max Bacterial Enhancement Reagent除了破壁之外還有什么作用么？比如可以固定RNA防止被降解？ 問(wèn)2：經(jīng)過(guò)幾次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Max Bacterial Enhancement Reagent試劑是失效的。這是因?yàn)橛肕ax Bacterial Enhancement Reagent提取沒(méi)有提取到RNA。但是采用100微升 TE(pH8.0)溶解的3 mg/ml溶菌酶，37度，處理8分鐘后，提取到了RNA。說(shuō)明trizol是可用的。但是帶來(lái)一個(gè)擔(dān)心：在溶菌酶處理過(guò)程中，RNA有沒(méi)有可能發(fā)生部分降解？（畢竟沒(méi)有RNA保護(hù)劑之類存在）對(duì)于獲得的total RNA用來(lái)RNA-SEQ時(shí)，是不是會(huì)丟失一些低豐度的信息？另外一個(gè)困擾：采用溶菌酶處理后，電泳為三條條帶，BD2000測(cè)定RNA質(zhì)量尚可（260/280=2左右），但是濃度好低，1ml菌液僅提取了大概200 ng/ul的濃度(用40ul Rnase-free ddw溶解)，有人可以給出可能的原因么？是細(xì)胞破壁不完全么（實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有顯微鏡，沒(méi)法鏡檢溶菌效果）？ 問(wèn)3：該試劑盒提到每ml trizol對(duì)應(yīng)的菌的數(shù)量不超過(guò)10的8次方，請(qǐng)問(wèn)有人知道枯草芽胞桿菌在LB培養(yǎng)基下，OD為1時(shí)大概是多少菌的數(shù)量么？ 謝謝大家！ |
回復(fù)此樓» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲(chóng)僅提供交流平臺(tái)，不對(duì)該內(nèi)容負(fù)責(zé)。
本內(nèi)容由用戶自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識(shí)產(chǎn)權(quán)問(wèn)題，其責(zé)任在于用戶本人，如對(duì)版權(quán)有異議，請(qǐng)聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : TRIzol_Max_Bacterial_RNA_Isolation_Kit.pdf
2013-12-23 16:56:49, 174.61 K
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有183人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 大家看看我這個(gè)革蘭氏陽(yáng)性菌的總RNA提取電泳圖是怎么回事
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 如何去除RNA提取過(guò)程中的蛋白質(zhì)污染
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 請(qǐng)大哥大姐們幫我看下圖，判斷一下革蘭氏陽(yáng)性陰性，短桿長(zhǎng)桿，有無(wú)芽孢?
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 革蘭氏陽(yáng)性菌RNA提取問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
w_goodluck
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 100
- 散金: 232
- 紅花: 1
- 帖子: 169
- 在線: 30.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2520034
- 注冊(cè): 2013-06-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
2樓2013-12-23 17:52:53
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
w_goodluck: 回帖置頂 2013-12-29 22:10:36
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-01-27 21:24:20
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
w_goodluck: 回帖置頂 2013-12-29 22:10:36
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-01-27 21:24:20
|
1. 沒(méi)用過(guò)你說(shuō)的這個(gè)kit。TRIZOL的作用是裂解細(xì)胞的。Max Bacterial Enhancement Reagent很可能是核酸酶抑制劑，用于失活核酸酶，防止RNA降解的。你用了Max Bacterial Enhancement Reagent提不到RNA應(yīng)該是細(xì)胞本身比較難破，普通的步驟下trizol不能很好的裂解細(xì)胞，也就是為什么你用溶菌酶處理后得到RNA的原因。你可以試試加TRIZOL后用65°C處理5-10min來(lái)代替室溫。 2. 用溶菌酶處理時(shí)當(dāng)然可能造成RNA的降解。加TRIZOL后因?yàn)轶w系里有酚，可以一定程度上避免RNA降解。一般RNA量少的原因都是破碎不完全。 3. TRIZOL試劑是有這個(gè)說(shuō)明，不過(guò)你可以適當(dāng)增加一點(diǎn)（10倍以內(nèi)）。沒(méi)有做過(guò)枯草芽胞桿菌，不清楚OD與細(xì)胞數(shù)對(duì)應(yīng)的關(guān)系。 |
3樓2013-12-24 09:13:55
w_goodluck
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 100
- 散金: 232
- 紅花: 1
- 帖子: 169
- 在線: 30.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2520034
- 注冊(cè): 2013-06-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
4樓2013-12-24 11:05:29
w_goodluck
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 100
- 散金: 232
- 紅花: 1
- 帖子: 169
- 在線: 30.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2520034
- 注冊(cè): 2013-06-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
5樓2013-12-25 07:24:05
默默是我
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 60.6
- 帖子: 28
- 在線: 1.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 7204491
- 注冊(cè): 2017-09-19
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
6樓2018-08-31 11:02:18
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 w_goodluck 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工學(xué)調(diào)劑 +7 | 用戶573181 2026-03-20 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 324 +3 | Promise-jyl 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +10 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +3 | YNRYG 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +12 | 申子申申 2026-03-19 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿海大，0703化學(xué)學(xué)碩304分，有大創(chuàng)項(xiàng)目，四級(jí)已過(guò) +6 | 幸運(yùn)哩哩 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 289材料與化工（085600）B區(qū)求調(diào)劑 +3 | 這么名字咋樣 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 26研0 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 初始318分求調(diào)劑（有工作經(jīng)驗(yàn)） +3 | 1911236844 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +6 | 想上岸的鯉魚(yú) 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)，327分，材料與化工085600 +9 | Ncdx123456 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +4 | 小材化本科 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +4 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩 +5 | Charlieyq 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南理工085701環(huán)境302求調(diào)劑院校 +3 | 葵梓衛(wèi)隊(duì) 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)家禽遺傳育種課題組2026年碩士招生（接收計(jì)算機(jī)專業(yè)調(diào)劑） +3 | 123阿標(biāo) 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|