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gemini我在新蟲 (初入文壇)
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[交流]
EMSA技術(shù) 已有1人參與
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從去年開始做EMSA，有成功的，有做不出來的，最近幾次做的效果一直不好。。。 我用的是賽默飛的EMSA試劑盒，biotin探針試劑盒也是賽默飛的，抽核蛋白也是賽默飛的kit，最近做出來的都是只有引物帶沒有binding？？ 1 我用的是4%的非變性凝膠 2 反應(yīng)體系里面把試劑盒給出的optional的都加了 50%甘油 1ul 1%NP40 1ul 1M KCL 1ul 100mM Mgcl2 。。 200mM EDTA 。。 dI.dC。。 DTT 。。 10*binding buffer 2ul biotin-DNA 2ul 核蛋白 5ug 20ul體系 室溫30min 電泳 3 電泳 100v 溴酚藍(lán)到底 4 轉(zhuǎn)膜 380mA 60min 剩下的操作都是和試劑盒中一樣，但就是只有游離探針的帶。。。  哪里會(huì)有問題呢？ ps這個(gè)探針以前用過，可以binding下來的 [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ] |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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我嚴(yán)格按照pierce的操作說明做的，只不過沒有尼龍膜，用的PVDF膜。上了7個(gè)樣，每個(gè)樣是相同的蛋白，不同的探針，跑出來卻是這樣的。我實(shí)在不明白哪里出錯(cuò)了，今天又跑了一次，用的pierce的質(zhì)控反應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)果質(zhì)控也只有一個(gè)泳道有帶，我自己的樣品還是沒有出帶。求問各位高手，幫我分析原因�，F(xiàn)在急死了，這個(gè)不做出來，后面的實(shí)驗(yàn)做不下去。。。（本人沒有金幣。。只能這樣發(fā)布了） 1389383017.jpg |
2樓2014-01-15 20:48:37
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