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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA技術
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[交流]
EMSA技術 已有1人參與
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從去年開始做EMSA，有成功的，有做不出來的，最近幾次做的效果一直不好。。。 我用的是賽默飛的EMSA試劑盒，biotin探針試劑盒也是賽默飛的，抽核蛋白也是賽默飛的kit，最近做出來的都是只有引物帶沒有binding？？ 1 我用的是4%的非變性凝膠 2 反應體系里面把試劑盒給出的optional的都加了 50%甘油 1ul 1%NP40 1ul 1M KCL 1ul 100mM Mgcl2 。。 200mM EDTA 。。 dI.dC。。 DTT 。。 10*binding buffer 2ul biotin-DNA 2ul 核蛋白 5ug 20ul體系 室溫30min 電泳 3 電泳 100v 溴酚藍到底 4 轉膜 380mA 60min 剩下的操作都是和試劑盒中一樣，但就是只有游離探針的帶。。。  哪里會有問題呢？ ps這個探針以前用過，可以binding下來的 [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ] |
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2樓2014-01-15 20:48:37
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