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檸檬可樂(lè)星新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
測(cè)序公司采用的測(cè)序原理是什么？ 已有2人參與
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各位大蝦：知不知道一些測(cè)序公司，比如華大、生工、英濰，現(xiàn)在測(cè)序一般用的什么技術(shù)，原理是什么？ 我主要是想搞清楚他們反饋的測(cè)序結(jié)果是那條鏈的序列。 比如我是用pMD 19-T載體克隆后送測(cè)的，我要求正向測(cè)序，結(jié)果他們用M13F引物測(cè)的，那么得到的序列是正義鏈還是反義鏈呢？ |
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1、你的目的片段和PMD-19T載體連接是不定向的 2、測(cè)序公司所說(shuō)的正向和反向是針對(duì)載體（如PMD-19T）來(lái)說(shuō)的 3、對(duì)于PMD-19T來(lái)說(shuō)，M13F引物所在的那條鏈即為所謂的正向（正義），M13R為反向（反義） 4、因此，如果你不知道你的目的片段的連接方向如何，那么正向測(cè)序結(jié)果既也有可能測(cè)出你的目的片段是正向也有可能是反向 5、可以用M13F和你的目的片段的反向引物跑PCR檢測(cè)，如果能跑出片段則為正向連接，如果M13F和你的目的片段正向引物能跑出來(lái)，則為反向連接； |
8樓2013-12-25 17:25:08
sarah-miao
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2樓2013-12-25 15:31:54
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檸檬可樂(lè)星
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4樓2013-12-25 15:48:09
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