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fangyuanpan

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 做蛋白質(zhì)純化該怎么脫鹽已有4人參與

最近做原核表達(dá)，目的蛋白通過(guò)Ni柱已經(jīng)收集，下一步想脫鹽，但是沒(méi)頭緒，請(qǐng)各位幫忙指點(diǎn)一下。用G-25柱，洗脫液用什么洗脫，怎么檢測(cè)目的蛋白是否出來(lái)。

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1樓 2013-12-27 13:11:59

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lihe131

至尊木蟲(chóng) (文壇精英)

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【答案】應(yīng)助回帖

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透析，或者過(guò)分子篩，或者反復(fù)濃縮稀釋。

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4樓2013-12-27 23:57:23

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劍客心語(yǔ)

木蟲(chóng) (小有名氣)

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★
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-27 17:05:47

樓主所說(shuō)的鹽分是指什么？NI柱純化的蛋白所去除一般是尿素或咪唑，對(duì)此我一般采用透析法（用PBS或Tris-HCl緩沖液作為透析液，蛋白中的鹽分通過(guò)透析袋置換到透析液中）

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一柄駐劍，一朝旅人，一顆常心，一生志言……行疆漫漫，品味一生……

3樓2013-12-27 16:06:30

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fuyuandj86

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-28 21:14:36

你都自己說(shuō)了用G-25除鹽了還問(wèn)怎么除鹽
洗脫液就用你想用于保存蛋白的緩沖液
用Bradford判斷目的蛋白是否出來(lái)

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

5樓2013-12-28 03:06:30

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flll2014

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我們用的是PD-10柱子，是鎳柱說(shuō)明書(shū)給推薦的，你看下你的鎳柱說(shuō)明書(shū)怎么寫的，檢測(cè)目的蛋白可用紫外檢測(cè)儀，很明顯能看到一個(gè)蛋白峰和一個(gè)鹽峰

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6樓2014-08-16 15:21:33

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普通表情龍兔虎貓

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