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jessttt金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
分子克隆里空轉(zhuǎn)載體的目的 已有4人參與
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1.請(qǐng)問(wèn)分子克隆里面，凡是構(gòu)建了重組載體，就一定要同時(shí)要做空轉(zhuǎn)載體的對(duì)照嗎？這個(gè)陰性對(duì)照是為了說(shuō)明什么呢，一直都不太明白。。。。 2.怎樣檢測(cè)重組質(zhì)粒已經(jīng)成功了--法一：抽提質(zhì)粒后進(jìn)行測(cè)序？ 法二：用另外的酶去切質(zhì)粒，然后再測(cè)序？？ 法三：請(qǐng)大俠指點(diǎn)。。。。 小蟲(chóng)子剛剛做實(shí)驗(yàn)~求親們指點(diǎn)哈！   |
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2樓2013-12-29 10:49:35
cicelyzh
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1. 空質(zhì)粒上帶有抗性基因，如果是表達(dá)質(zhì)粒，往往還有強(qiáng)啟動(dòng)子或者誘導(dǎo)啟動(dòng)子。這些元件的導(dǎo)入可能對(duì)宿主造成未知的影響，只用野生型做對(duì)照往往說(shuō)服力不強(qiáng)，所以需要把空載體導(dǎo)入宿主作為對(duì)照。 2. 先自己酶切鑒定，如果酶切圖譜正確，說(shuō)明插入片段很可能是正確的。然后測(cè)序驗(yàn)證插入片段的序列沒(méi)有問(wèn)題。 |
3樓2013-12-29 12:40:43
cicelyzh
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1. 空質(zhì)粒上帶有抗性基因，如果是表達(dá)質(zhì)粒，往往還有強(qiáng)啟動(dòng)子或者誘導(dǎo)啟動(dòng)子。這些元件的導(dǎo)入可能對(duì)宿主造成未知的影響，只用野生型做對(duì)照往往說(shuō)服力不強(qiáng)，所以需要把空載體導(dǎo)入宿主作為對(duì)照。 2. 先自己酶切鑒定，如果酶切圖譜正確，說(shuō)明插入片段很可能是正確的。然后測(cè)序驗(yàn)證插入片段的序列沒(méi)有問(wèn)題。 |
4樓2013-12-29 12:41:17
cicelyzh
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1. 空質(zhì)粒上帶有抗性基因，如果是表達(dá)質(zhì)粒，往往還有強(qiáng)啟動(dòng)子或者誘導(dǎo)啟動(dòng)子。這些元件的導(dǎo)入可能對(duì)宿主造成未知的影響，只用野生型做對(duì)照往往說(shuō)服力不強(qiáng)，所以需要把空載體導(dǎo)入宿主作為對(duì)照。 2. 先自己酶切鑒定，如果酶切圖譜正確，說(shuō)明插入片段很可能是正確的。然后測(cè)序驗(yàn)證插入片段的序列沒(méi)有問(wèn)題。 |
5樓2013-12-29 12:41:38
周志惠
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6樓2013-12-30 09:04:56
jessttt
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7樓2013-12-30 09:53:44
jessttt
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8樓2013-12-30 09:54:25
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9樓2013-12-30 12:07:51
| 感謝分享感謝分享 |
10樓2013-12-30 19:23:15
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