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1樓 2014-01-04 20:02:48

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樓主，你應(yīng)該把你的引物圖譜也亮出來(lái)，這樣才能看到更多的問(wèn)題，才能排除；
DNA模板的濃度問(wèn)題，模板純度問(wèn)題抑或有引物配比問(wèn)題，沒(méi)能形成特定條帶

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2樓: Originally posted by gyl121 at 2014-01-05 13:18:03
樓主，你應(yīng)該把你的引物圖譜也亮出來(lái)，這樣才能看到更多的問(wèn)題，才能排除；
DNA模板的濃度問(wèn)題，模板純度問(wèn)題抑或有引物配比問(wèn)題，沒(méi)能形成特定條帶

謝謝你！PCR完跑瓊脂糖膠條帶清晰而且很亮，模板的濃度都是一百多，個(gè)別有二百多的（ng/微升），純度用nanodrop測(cè)得都介于1.8-1.9之間（260/280）。
只有一次，我把CR產(chǎn)物純化之后再跑膠，圖片條帶很清楚，但是所有泳道都一樣了。都沒(méi)有繼續(xù)下去的動(dòng)力了，不知道哪里出了問(wèn)題

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3樓2014-01-06 08:49:45

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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-01-09 08:56:17

慢慢來(lái)嘛，我目前也碰到不少問(wèn)題，你的模板是沒(méi)問(wèn)題的了，你應(yīng)該注意體系，引物，酶等，這些也是很重要的，引物是自己設(shè)計(jì)的嗎？聽(tīng)你的意思，好像是要找各樣品不同的條帶，多態(tài)性是吧？

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變性梯度選擇的范圍不合適吧，明顯都跑到下面去了

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5樓2014-01-07 11:13:24

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4樓: Originally posted by gyl121 at 2014-01-07 10:32:37
慢慢來(lái)嘛，我目前也碰到不少問(wèn)題，你的模板是沒(méi)問(wèn)題的了，你應(yīng)該注意體系，引物，酶等，這些也是很重要的，引物是自己設(shè)計(jì)的嗎？聽(tīng)你的意思，好像是要找各樣品不同的條帶，多態(tài)性是吧？

又試了一下同一塊膠上跑純化的和不純化的，純化的很清楚，初步推測(cè)是我用的酶不合適，下次換個(gè)酶試試
引物是我自己設(shè)計(jì)的，GC夾是文獻(xiàn)上的，
是要看多態(tài)性
你用的是什么酶呀？

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6樓2014-01-08 18:19:46

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我也準(zhǔn)備做DGGE請(qǐng)問(wèn)前輩 PCR產(chǎn)物是怎么純化的切膠回收？

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7樓2014-01-12 10:42:45

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7樓: Originally posted by 淼淼兮 at 2014-01-12 10:42:45
我也準(zhǔn)備做DGGE請(qǐng)問(wèn)前輩 PCR產(chǎn)物是怎么純化的切膠回收？

不需要純化，我是病急亂投醫(yī)，是在找不到原因了，就想是不是PCR時(shí)用的mix不合適呢，所以切膠回收又跑了一下。你要做好失敗的心理準(zhǔn)備，而且是多次失敗，祝你好運(yùn)！

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8樓2014-01-14 19:34:52

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