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shalimar1989新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌RNA提取求大蝦幫忙 已有2人參與
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本人要提取大腸桿菌的RNA做熒光定量PCR，本以為大腸的很好提，沒(méi)想到提了1個(gè)多月也沒(méi)有好結(jié)果，求指導(dǎo)�。。“葜x啊 我的問(wèn)題如下： 1 菌液量如何控制，有報(bào)道說(shuō)要10 +7數(shù)量級(jí)的細(xì)胞，可是1od菌濃度就已經(jīng)10 +8數(shù)量級(jí)了吧？難道1OD的菌液就要稀釋10倍？我稀釋以后菌量很少 根本提不出來(lái)，應(yīng)該怎么去菌液呢？麻煩大蝦指導(dǎo)清楚點(diǎn)，一般OD多少菌液取多少毫升，加多少Trizol？ 2 加Trizol要反復(fù)吹打嗎？靜置多久合適？ 3 加異丙醇后需要靜置嗎？多久合適？其實(shí)我沒(méi)靜置時(shí)也有提出來(lái)過(guò)，見(jiàn)圖，只是降解嚴(yán)重也有DNA污染，會(huì)不會(huì)不靜置沉淀不充分呢？ 4 我發(fā)現(xiàn)用試管的菌液提取相對(duì)容易，而我轉(zhuǎn)搖瓶發(fā)酵后就很難提取出來(lái)RNA了，取樣也處于生長(zhǎng)期的菌體，這個(gè)是什么問(wèn)題呢？？？ 圖中是我提的試管培養(yǎng)12小時(shí)的菌液，沒(méi)稀釋?zhuān)�能出現(xiàn)條帶，發(fā)酵的菌液根本提不出來(lái)，一條帶也沒(méi)有，到底怎么回事呢。。。 11.21.jpg |
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eagles123
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2樓2014-01-05 11:04:12
shalimar1989
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3樓2014-01-05 12:04:30
yangpanfei
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4樓2014-01-07 11:52:53
shalimar1989
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5樓2014-01-07 13:09:19
yangpanfei
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6樓2014-01-07 15:04:52
shalimar1989
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