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shalimar1989新蟲 (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌RNA提取求大蝦幫忙 已有2人參與
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本人要提取大腸桿菌的RNA做熒光定量PCR，本以為大腸的很好提，沒想到提了1個多月也沒有好結(jié)果，求指導(dǎo)�。�！拜謝啊 我的問題如下： 1 菌液量如何控制，有報道說要10 +7數(shù)量級的細(xì)胞，可是1od菌濃度就已經(jīng)10 +8數(shù)量級了吧？難道1OD的菌液就要稀釋10倍？我稀釋以后菌量很少 根本提不出來，應(yīng)該怎么去菌液呢？麻煩大蝦指導(dǎo)清楚點，一般OD多少菌液取多少毫升，加多少Trizol？ 2 加Trizol要反復(fù)吹打嗎？靜置多久合適？ 3 加異丙醇后需要靜置嗎？多久合適？其實我沒靜置時也有提出來過，見圖，只是降解嚴(yán)重也有DNA污染，會不會不靜置沉淀不充分呢？ 4 我發(fā)現(xiàn)用試管的菌液提取相對容易，而我轉(zhuǎn)搖瓶發(fā)酵后就很難提取出來RNA了，取樣也處于生長期的菌體，這個是什么問題呢？？？ 圖中是我提的試管培養(yǎng)12小時的菌液，沒稀釋，還能出現(xiàn)條帶，發(fā)酵的菌液根本提不出來，一條帶也沒有，到底怎么回事呢。。。 11.21.jpg |
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yangpanfei
禁蟲 (正式寫手)
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4樓2014-01-07 11:52:53
eagles123
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5樓2014-01-07 13:09:19
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