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CTAB法提取真菌DNA,得到白色乳膠狀透明沉淀,TE不溶。。。。 已有1人參與
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最近在用CTAB法提取真菌的DNA,方法步驟如下: 1. 取適量菌絲,加入液氮研磨成粉末狀,加入600 μL CTAB抽提液中,65℃溫浴1 h。 2. 在抽提液中加入650 μL氯仿-異戊醇(24﹕1),混勻后離心取上清 3. 同法再抽提1遍。 4. 在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液,室溫沉淀30 min,12 000 r/min 離心4 min,倒上清。(這一步看到沉淀,透明乳膠狀。) 5. 將沉淀溶于 400 μL高鹽 TE,37℃30 min溶解。(這步30min時,沉淀并未溶解。第一次做,并沒有經(jīng)驗,所以接著進行了下一步) 6. 加入兩倍體積-20℃無水乙醇在-20℃沉淀2 h,12 000 r/min 離心5 min,風(fēng)干后加入80 μLTE。(這步加入TE后沉淀同樣沒溶解) CTAB抽提液: 200ml 2% CTAB,100 mM Tris-HCl (pH 8.0),20 mMEDTA,pH 8.0,1.4 M NaCl,2% β-巰基乙醇 CTAB 沉淀液:100ml 1% CTAB,50 mMTris-HCl(pH 8.0),10 mM EDTA 高鹽 TE 100mL 10 mM Tris-HCl(pH 8.0),0.1 mM EDTA,1 M NaCl 不知道那沉淀到底是什么東西,是DNA嗎?不是的話那又是什么?以上步驟哪部出了問題?還請各位多幫忙,拜謝。 |
鐵桿木蟲 (正式寫手)

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