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love_糖糖

金蟲 (正式寫手)

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[求助] CTAB法提取真菌DNA，得到白色乳膠狀透明沉淀，TE不溶。。。。已有1人參與

最近在用ＣＴＡＢ法提取真菌的ＤＮＡ，方法步驟如下：
1. 取適量菌絲，加入液氮研磨成粉末狀，加入600 μL CTAB抽提液中，65℃溫浴1 h。
2. 在抽提液中加入650 μL氯仿-異戊醇（24﹕1），混勻后離心取上清
3. 同法再抽提1遍。
4. 在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液，室溫沉淀30 min，12 000 r/min 離心4 min，倒上清。（這一步看到沉淀，透明乳膠狀。）
5. 將沉淀溶于 400 μL高鹽 TE，37℃30 min溶解。（這步３０ｍｉｎ時，沉淀并未溶解。第一次做，并沒有經(jīng)驗，所以接著進行了下一步）
6. 加入兩倍體積-20℃無水乙醇在-20℃沉淀2 h，12 000 r/min 離心5 min，風(fēng)干后加入80 μLTE。（這步加入ＴＥ后沉淀同樣沒溶解）

CTAB抽提液: 200ml
2% CTAB，100 mM Tris-HCl （pH 8.0），20 mMEDTA，pH 8.0，1.4 M NaCl，2% β-巰基乙醇
CTAB 沉淀液:100ml
1% CTAB，50 mMTris-HCl（pH 8.0），10 mM EDTA
高鹽 TE 100mL
10 mM Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mM EDTA，1 M NaCl
不知道那沉淀到底是什么東西，是ＤＮＡ嗎？不是的話那又是什么？以上步驟哪部出了問題？還請各位多幫忙，拜謝。

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1樓 2014-01-09 16:06:11

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lvbobo823

鐵桿木蟲 (正式寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
love_糖糖: 金幣+2, ★有幫助 2014-01-13 22:20:31

在提植物DNA時也出現(xiàn)這種情況，一般是些蛋白。

贊一下

回復(fù)此樓

hehe

2樓2014-01-09 17:09:28

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