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曾經(jīng)走過(guò)金蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
用實(shí)驗(yàn)區(qū)分mRNA 和ncRNA
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| 如題::在研究中發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的長(zhǎng)RNA分子,設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)研究它是編碼蛋白質(zhì)的mRNA、還是非編碼RNA。 |
新蟲(chóng) (初入文壇)
金蟲(chóng) (初入文壇)
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驗(yàn)證是mRNA還是ncRNA:真核生物中的mRNA有明顯的特征序列,即5’帽子(m7G)和3’Poly(A)尾巴。而哺乳動(dòng)物mRNA的3’端有20-30個(gè)腺苷酸組成的Poly(A)尾,可以作為鑒別mRNA的標(biāo)志。 具體方法:首先合成15-20的聚dT和聚dA——>先進(jìn)行聚dT的單引物PCR,經(jīng)過(guò)5-10個(gè)循環(huán)——>加入聚dA繼續(xù)進(jìn)行PCR,經(jīng)過(guò)25個(gè)循環(huán)——>結(jié)束后,進(jìn)行電泳。如果得到了相應(yīng)的擴(kuò)增條帶,說(shuō)明此核苷酸序列是mRNA;反之,則為非編碼RNA。 |
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