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[求助]
提純馬血清的IgG 已有1人參與
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| 根據(jù)網(wǎng)上提供的資料用鹽析沉淀（硫酸銨沉淀）法粗提馬血清中igg，其中有一步是“ 透析除鹽，在常水中透析過夜，再在生理鹽水中于4℃透析24h，中間換液數(shù)次。”，在常水中透析過夜后，發(fā)現(xiàn)透析袋中有沉淀，是不是蛋白變性了，是什么原因呢？捉急，用的是Green Bird 透析袋，截留量是7000 |
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4樓2014-02-12 19:38:26
2樓2014-02-07 16:11:51
3樓2014-02-12 14:18:33
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1．取20ml血清，加生理鹽水20ml，再逐滴加入(NH4 )2 SO4 飽和溶液10ml，使成20％(NH4 )2 SO4 溶液，邊加邊攪拌，充分混合后，靜置30min。 2．3 000r/min離心20min，棄去沉淀，以除去纖維蛋白。 3．在上清液中再加(NH4 )2 SO4 飽和溶液30ml，使成50％（(NH4 )2 SO4 溶液，充分混合，靜置30min。 4．3 000r/min離心20min，棄上清。 5．于沉淀中加20ml生理鹽水，使之溶解，再加(NH4)2SO4飽和溶液10ml，使成33％(NH4 )2 SO4 溶液，充分混合后，靜置30min。 6． 3 000r/min離心20min，棄上清，以除去白蛋白。重復步驟5，2-3次。 7． 用10ml生理鹽水溶解沉淀，裝入透析袋。 8． 透析除鹽，在常水中透析過夜，再在生理鹽水中于4℃透析24h，中間換液數(shù)次。 以1％BaCl2 檢查透析液中的SO42-，直至無 SO42-出現(xiàn)為止。也可采用SephadexG25或電透析除鹽。 9、離心去沉淀（去除雜蛋白），上清液即為粗提IgG （即γ球蛋白，如以36%的飽和硫酸銨沉淀血清的產(chǎn)物即為優(yōu)球蛋白，Euglobin，含γ球蛋白）。 |
5樓2014-02-13 11:07:41
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