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[求助] 請(qǐng)問(wèn)血清RNA怎樣提�。坑衷鯓域�(yàn)證已提取出血清RNA？已有7人參與

如題：請(qǐng)問(wèn)血清RNA怎樣提��？又怎樣驗(yàn)證已提取出血清RNA？
謝謝�。�

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1樓 2011-11-17 15:43:53

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wanhscn(金幣+2): good!鼓勵(lì)交流! 2011-11-19 18:31:46

人血液（全血，也就醫(yī)學(xué)上說(shuō)的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是處理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有兩種思路：
1）直接處理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有個(gè)缺點(diǎn)：處理的體積血液體積有限，一般1ml Trizol處理100ul血液，最多不超過(guò)200ul.
2) 先去除血液中的紅細(xì)胞分離出其中的白細(xì)胞（即淋巴細(xì)胞），然后提取白細(xì)胞的RNA。此方法的缺點(diǎn)：只能提取得到淋巴細(xì)胞的RNA，血液中游離的如病毒RNA無(wú)法提得。

你的血清是直接離心分離的嗎? 如果只是做PCR，估計(jì)你直接弄200ul加Trizol提取就可以了。如果不行再?gòu)拈L(zhǎng)計(jì)議。。。

血液是很復(fù)雜的。。。

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4樓2011-11-18 09:52:38

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血清RNA含量低，可以用TRIZOL，過(guò)程有點(diǎn)麻煩，氯仿毒性較大，我們實(shí)驗(yàn)室目前用的是BIOG血清提取試劑，效果與TRIZOL差不多。

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18樓2018-12-03 23:18:25

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有多大體積的血清？什么物種？提到后續(xù)實(shí)驗(yàn)做什么？要多少ng RNA？有什么特殊要求？

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2樓2011-11-17 16:12:26

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2樓: Originally posted by longrna at 2011-11-17 16:12:26:
有多大體積的血清？什么物種？提到后續(xù)實(shí)驗(yàn)做什么？要多少ng RNA？有什么特殊要求？

有1ml左右的血清，是正常人的，想驗(yàn)證下血清中有沒(méi)有我所要的目的基因，想提出來(lái)后做個(gè)PCR，要求的話符合PCR擴(kuò)增的要求就可
謝謝！

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3樓2011-11-18 08:32:30

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4樓: Originally posted by longrna at 2011-11-18 09:52:38:
人血液（全血，也就醫(yī)學(xué)上說(shuō)的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是處理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有兩種思路：
1）直接處理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法 ...

謝謝您的回復(fù)！
我現(xiàn)在是想提出血清中的RNA，也就是外周血經(jīng)過(guò)離心后的上清。
我現(xiàn)在想看下我的目的基因是否在血清中也存在，我用Trizol提取了血清中的RNA，但是不知道是否提出來(lái)，怎樣檢測(cè)已經(jīng)提出血清中的RNA?比如用一種內(nèi)參，但是好像b-actin不行，因?yàn)檠逯袥](méi)有b-actin

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5樓2011-11-18 10:01:36

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xan36(金幣+2): 謝謝回復(fù) 2011-11-19 08:36:45

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6樓2011-11-18 10:52:11

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xan36(金幣+2): 謝謝回復(fù)！ 2011-11-19 08:36:59

很多公司有RNA的提取試劑盒，可以從血清里面提出RNA，不過(guò)量不會(huì)太多。質(zhì)量可以用nadodrop或者分光光度計(jì)來(lái)測(cè)，建議用 nanodrop

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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

7樓2011-11-18 12:31:02

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可以跑電泳啊，或者做real-time PCR

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8樓2011-11-19 17:33:25

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wanhscn(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-11-21 09:02:26

老實(shí)說(shuō)，1ml的血清提RNA不好做。。。
產(chǎn)量估計(jì)不到1ug，全跑電泳估計(jì)勉強(qiáng)可以看得見(jiàn)吧....
不是很理解LZ所說(shuō)的驗(yàn)證已提取RNA是指什么驗(yàn)證。是指此提取方法行不行得通還是說(shuō)你懷疑自己的操作？
LZ提出RNA要怎么處置她��？不妨就以那個(gè)來(lái)驗(yàn)證唄

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9樓2011-11-19 21:24:10

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9樓: Originally posted by longrna at 2011-11-19 21:24:10:
老實(shí)說(shuō)，1ml的血清提RNA不好做。。。
產(chǎn)量估計(jì)不到1ug，全跑電泳估計(jì)勉強(qiáng)可以看得見(jiàn)吧....
不是很理解LZ所說(shuō)的驗(yàn)證已提取RNA是指什么驗(yàn)證。是指此提取方法行不行得通還是說(shuō)你懷疑自己的操作？
LZ提出RNA要怎么 ...

謝謝回復(fù)~
我是想驗(yàn)證下血清中有沒(méi)有我所檢測(cè)的目的基因。
因?yàn)檠逯蠷NA含量肯定很微量，而且現(xiàn)在通過(guò)擴(kuò)增的結(jié)果是陰性的，為了排除并不是血清中不存在我的基因而不是RNA根本沒(méi)有提取出來(lái)，我想驗(yàn)證下RNA是否成功提取。

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10樓2011-11-20 09:36:34

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