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henghengyouyou銀蟲 (正式寫手)
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質(zhì)粒測(cè)序無信號(hào)，為啥？ 已有3人參與
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各位，最近我做了PCR產(chǎn)物純化，加A，連接TA vector,挑單克隆，提取質(zhì)粒準(zhǔn)備送去測(cè)序。 單克隆菌液PCR都為陽(yáng)性，抽提質(zhì)粒后也表明重組質(zhì)粒要比空載質(zhì)粒大很多，應(yīng)該是片段克隆進(jìn)入載體了。 但是為啥我用引物測(cè)序無信號(hào)呢，包括通用引物和克隆引物？什么情況？ |
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wangdunzju
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可以從兩個(gè)方面分析; 第一種情況：PCR產(chǎn)物不純，連入載體的不是目的序列，這需要你用通用引物和特異引物分別PCR檢測(cè)可以判斷是不是這種情況。檢測(cè)最好用菌液PCR，不用菌斑PCR。 第二種情況：插入片段是你的目的片段，但后期出問題了，比如，搖菌的菌株有污染，（如培養(yǎng)基污染了別人的菌，也有抗性）。再或者搖菌的濃度太稀，也測(cè)不出來，這可能是測(cè)序那邊的問題。還有你的載體是不是用對(duì)了，要是這個(gè)都搞錯(cuò)了，估計(jì)也會(huì)遇到類似問題出現(xiàn)。 祝好運(yùn)！ |
2樓2014-02-13 10:32:28
wangdunzju
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