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henghengyouyou銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
質(zhì)粒測序無信號,為啥? 已有3人參與
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各位,最近我做了PCR產(chǎn)物純化,加A,連接TA vector,挑單克隆,提取質(zhì)粒準(zhǔn)備送去測序。 單克隆菌液PCR都為陽性,抽提質(zhì)粒后也表明重組質(zhì)粒要比空載質(zhì)粒大很多,應(yīng)該是片段克隆進(jìn)入載體了。 但是為啥我用引物測序無信號呢,包括通用引物和克隆引物?什么情況? |
實(shí)驗(yàn)求助 |
新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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可以從兩個方面分析; 第一種情況:PCR產(chǎn)物不純,連入載體的不是目的序列,這需要你用通用引物和特異引物分別PCR檢測可以判斷是不是這種情況。檢測最好用菌液PCR,不用菌斑PCR。 第二種情況:插入片段是你的目的片段,但后期出問題了,比如,搖菌的菌株有污染,(如培養(yǎng)基污染了別人的菌,也有抗性)。再或者搖菌的濃度太稀,也測不出來,這可能是測序那邊的問題。還有你的載體是不是用對了,要是這個都搞錯了,估計也會遇到類似問題出現(xiàn)。 祝好運(yùn)! |
鐵桿木蟲 (正式寫手)

銀蟲 (正式寫手)
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