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哈圖薩斯90銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
大腸中異源表達(dá)植物基因求助 已有2人參與
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各位蟲友大家好，小弟初做異源表達(dá)，對(duì)這方面知識(shí)不是很了解。 我想在大腸桿菌中表達(dá)一個(gè)植物蛋白酶，這個(gè)酶是由兩個(gè)亞基構(gòu)成的，分別命名A，B。兩個(gè)亞基需共表達(dá)后才有活性。 小弟不曉得如何同時(shí)表達(dá)AB兩個(gè)亞基基因。是否有特殊的載體和菌株或者成熟的異源表達(dá)系統(tǒng)？ 另外，由于涉及到酶活測(cè)定的問(wèn)題，對(duì)蛋白提純方法亦不是很清楚？還請(qǐng)蟲友幫忙解答。 最后，原核表達(dá)是否應(yīng)將信號(hào)肽去除？ 因?yàn)閷?duì)這方面不了解，所以有些問(wèn)題問(wèn)的不是很準(zhǔn)確，還請(qǐng)各位蟲友多擔(dān)待。 謝謝大家！感激不盡��！ [ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 17:25 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-02-15 16:54:23
哈圖薩斯90: 金幣+15, ★★★很有幫助 2014-02-15 18:35:33
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有pET系統(tǒng)的質(zhì)粒帶有兩個(gè)啟動(dòng)子可同時(shí)表達(dá)兩個(gè)蛋白，也可以用多順?lè)醋拥姆绞奖磉_(dá)，但后一個(gè)亞基一般表達(dá)量較低。 一般有HIS等標(biāo)簽用于后期親和純化。 要出去信號(hào)肽。 |
2樓2014-02-15 14:52:06
西門吹雪170
榮譽(yù)版主 (職業(yè)作家)
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3樓2014-02-15 15:24:41
哈圖薩斯90
銅蟲 (初入文壇)
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4樓2014-02-19 22:42:45
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