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http://pan.baidu.com/disk/home#d ... F%E7%89%A9%E5%AD%A6 我的百度云盤(pán)資料 還有這個(gè)http://pan.baidu.com/disk/home#d ... 6%E8%B5%84%E6%96%99 細(xì)胞工程（Cell engineering）是指主要以細(xì)胞為對(duì)象，應(yīng)用生命科學(xué)理論，借助工程學(xué)原理與技術(shù)，有目的地利用或改造生物遺傳性狀，以獲得特定的細(xì)胞、組織產(chǎn)品或新型物種的一門(mén)綜合性科學(xué)技術(shù)。 ◆研究對(duì)象：動(dòng)植物細(xì)胞（原生質(zhì)體），也包括細(xì)胞器、染色體、細(xì)胞核、胚胎。 細(xì)胞凋亡（apoptosis）：指機(jī)體為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序性死亡。 ◆細(xì)胞壞死（necrosis）：是細(xì)胞受到物理因素（如熱、輻射）、化學(xué)因素（如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有毒物質(zhì)）或生物因素（如病原體）作用，引起細(xì)胞無(wú)序變化的死亡過(guò)程。 貼壁型生長(zhǎng)細(xì)胞:附著在某一固相支持物表面才能 生長(zhǎng)的細(xì)胞。 懸浮型生長(zhǎng)細(xì)胞:不必附著于固相支持物表面，在懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)的細(xì)胞。 二）懸浮生長(zhǎng)型 培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)或以機(jī)械方法使之保持懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)的細(xì)胞叫懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞。 特點(diǎn)： 不貼附在支持物上 生長(zhǎng)，胞體圓形。 優(yōu)點(diǎn)：在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)空間大，提供數(shù)量大； 傳代方便(只需稀釋而不需消化處理)； 可長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)，繁殖旺盛便于做細(xì)胞代謝研究。 缺點(diǎn)：觀察不方便 很多細(xì)胞不能懸浮生長(zhǎng) 懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞與貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞相比， 具有哪些優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)？ 優(yōu)點(diǎn)：在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)空間大，提供數(shù)量大； 傳代方便(不需消化)； 可長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)，繁殖旺盛便于做細(xì)胞代謝研究。 缺點(diǎn)：觀察不方便 很多細(xì)胞不能懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞在體外生長(zhǎng)時(shí)具有貼附、接觸抑制和密度依賴性三大特點(diǎn)。 接觸抑制可作為區(qū)別正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志之一。 正常細(xì)胞生長(zhǎng)密度過(guò)大時(shí)，細(xì)胞變得擁擠，生存空間消失，同時(shí)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物被逐漸消耗掉，代謝產(chǎn)物增多，細(xì)胞停止分裂增殖，這種特性稱為密度抑制 思考題4：體外培養(yǎng)的細(xì)胞具有哪些生長(zhǎng)特點(diǎn)？ 體外培養(yǎng)細(xì)胞重要的生長(zhǎng)特點(diǎn)有：貼附并伸展以及接觸抑制和生長(zhǎng)的密度依賴性。 貼附并伸展，是多數(shù)體外培養(yǎng)細(xì)胞的基本生長(zhǎng)特 點(diǎn)。大多數(shù)細(xì)胞在體外均附著于一定的底物而生長(zhǎng)。培養(yǎng)細(xì)胞在未貼附于底物之前均似圓球樣，當(dāng)與底物貼附后，細(xì)胞逐漸伸展而形成一定的形態(tài) 接觸抑制是由于細(xì)胞相互接觸而抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性的現(xiàn)象。正常細(xì)胞不會(huì)發(fā)生相互重疊，而是呈單層細(xì)胞生長(zhǎng)。 密度抑制是當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到一定程度后，營(yíng)養(yǎng)相對(duì)缺乏，代謝產(chǎn)物增多，細(xì)胞受營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響而發(fā)生的現(xiàn)象，此時(shí)細(xì)胞停止分裂。 干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。 思考題5：體外培養(yǎng)細(xì)胞的生命期包括哪幾個(gè)時(shí)期？ 每一時(shí)期的細(xì)胞具有哪些特點(diǎn)？ 包括原代培養(yǎng)期、傳代培養(yǎng)期及衰退期。 原代培養(yǎng)期：細(xì)胞移動(dòng)活躍；可見(jiàn)細(xì)胞分裂，但不旺盛；呈二倍體核型；與體內(nèi)原組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能基本相似。 傳代培養(yǎng)期：細(xì)胞增殖旺盛，并維持二倍體核型。 衰退期：細(xì)胞增殖減慢，輪廓逐漸增強(qiáng)，走向 衰退凋亡。 生物學(xué)意義： 原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，故更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)。為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段； 作為傳代培養(yǎng)的基本條件； 可直接服務(wù)于臨床實(shí)踐，進(jìn)行藥物測(cè)試。例如，用從手術(shù)中切除的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，然后進(jìn)行抗癌藥物的篩選，根據(jù)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性來(lái)選擇最有效的化療方案 二、體外培養(yǎng)細(xì)胞有哪些類型？其生長(zhǎng)特點(diǎn)有什么區(qū)別？ 成纖維型細(xì)胞 貼壁型細(xì)胞 上皮型細(xì)胞 游走型細(xì)胞 多形型細(xì)胞 懸浮型細(xì)胞 生長(zhǎng)特點(diǎn)從形態(tài)、生長(zhǎng)形式等加以區(qū)別比較 潛伏期、指數(shù)生長(zhǎng)期和停滯期。 細(xì)胞有代謝及運(yùn)動(dòng)，但無(wú)增殖。細(xì)胞分裂相增多時(shí)，標(biāo)志細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期 細(xì)胞增殖最旺盛階段，分裂相增多，活力最佳 細(xì)胞不增殖，有代謝活動(dòng)。 血清存在的問(wèn)題 1. 存在有害于細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的物質(zhì)。如補(bǔ)體、免疫球蛋白和一些生長(zhǎng)抑制因子。 2. 成分不明確，影響對(duì)結(jié)果的分析。 3. 不同動(dòng)物、不同批次的血清和活性差別較大，使培養(yǎng)的結(jié)果不穩(wěn)定。 問(wèn)題1:體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要哪些物質(zhì)？ 水、糖、氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)離子和微量元素、血清和促生長(zhǎng)因子。 問(wèn)題2：體外培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞需要在什么環(huán)境下 生長(zhǎng)？如何獲得這些環(huán)境？ 溫度：36.5±0.5℃ pH：7.1~7.3 滲透壓：260~320mOsm/kg 氣體：95% O2和5%CO2 微生物污染細(xì)胞后的現(xiàn)象對(duì)比： 細(xì)菌：增殖快，短時(shí)間在數(shù)量上壓過(guò)細(xì)胞產(chǎn)生毒素殺死細(xì)胞。 真菌：種類繁多，形態(tài)各異，呈白色或淺黃色小點(diǎn)，飄浮于培養(yǎng)液面，肉眼可見(jiàn)。 支原體、病毒：無(wú)致死毒性，對(duì)細(xì)胞形態(tài)和機(jī)能的影響是長(zhǎng)期的、緩慢的和潛在的，短時(shí)間內(nèi)不易被發(fā)現(xiàn)。 問(wèn)題2：胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中起什么作用？ 1.補(bǔ)充培養(yǎng)液中沒(méi)有或量不足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)； 2.提供激素和各種生長(zhǎng)因子； 3. 提供結(jié)合蛋白； 4. 含有生長(zhǎng)基質(zhì)成分使細(xì)胞易貼附在培養(yǎng)器皿上； 5. 對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到保護(hù)作用。 問(wèn)題7：組織塊培養(yǎng)3~5天后換液的目的是什么？ 1、補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)； 2、去除代謝產(chǎn)物和漂浮小塊所產(chǎn)生的毒性作用。 問(wèn)題8：細(xì)胞傳代培養(yǎng)和細(xì)胞分裂之間有何關(guān)系？細(xì)胞傳代培養(yǎng)1次是細(xì)胞分裂1次嗎？ 細(xì)胞一代中，細(xì)胞分裂多次，細(xì)胞數(shù)量增加，達(dá)到飽和密度時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 問(wèn)題9：微生物的污染主要包括哪些類型？怎樣判斷培養(yǎng)的細(xì)胞污染了何種微生物？ 細(xì)菌、真菌、支原體和病毒污染。 細(xì)菌污染：培養(yǎng)液變混濁，胞內(nèi)顆粒增多，細(xì)胞變圓脫落死亡。 真菌污染：培養(yǎng)液中漂浮白色或淺黃色的小點(diǎn)，鏡下可見(jiàn)絲狀、管狀或樹(shù)枝狀的菌絲。 支原體污染：相差顯微鏡觀察，地衣紅染色觀察，熒光染色法觀察，電鏡檢測(cè)，培養(yǎng)檢測(cè)。 病毒污染：電鏡檢測(cè)，RT-PCR。 體外受精的早期胚胎在體外發(fā)育中，往往會(huì)停止在某一階段不再發(fā)育，這種現(xiàn)象稱為發(fā)育阻滯 同核體（homokaryon）：由同一基因型親本細(xì)胞融合而來(lái)。 異核體（heterokaryon）：由不同基因型親本胞融合而來(lái)。 二、細(xì)胞融合的主要過(guò)程 細(xì)胞在誘導(dǎo)劑或正弦電場(chǎng)作用下凝聚，彼此靠近； 兩個(gè)相鄰細(xì)胞之間的質(zhì)膜相互融合；質(zhì)膜上的受體、糖蛋白等質(zhì)膜成分在融合后的質(zhì)膜上重新分布； 細(xì)胞質(zhì)發(fā)生融合； 細(xì)胞核融合，形成融合細(xì)胞 人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法： 病毒誘導(dǎo)：滅活的仙臺(tái)病毒 化學(xué)誘導(dǎo)：PEG、Ca2+、溶血卵磷脂等 物理誘導(dǎo)：電誘導(dǎo) 常用方法有：抗藥性篩選；營(yíng)養(yǎng)缺陷型篩選；溫度敏感型篩選等。 抗體是由B細(xì)胞受抗原刺激后所分泌的蛋白質(zhì) B淋巴細(xì)胞 接受抗原刺激后，能分泌針對(duì)該抗原的特異性抗體，在體液免疫中具有重要功能 短命細(xì)胞 保 證骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 常用克隆化方法：有限稀釋法 軟瓊脂平板法 顯微操作法 問(wèn)題：整個(gè)制備過(guò)程為何要經(jīng)過(guò)兩次篩選? 第一次篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出多種雜交瘤細(xì)胞，但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞。 第二次篩選（克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)）：篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 懸浮培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)： 操作簡(jiǎn)便，培養(yǎng)條件比較均一，傳質(zhì)和傳氧效果比較好，容易擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模，在培養(yǎng)設(shè)備的設(shè)計(jì)和實(shí)際操作中可以借鑒許多細(xì)菌發(fā)酵的經(jīng)驗(yàn)。 ◆懸浮培養(yǎng)的缺點(diǎn)： 不能采用灌流培養(yǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞密度較低，另外只有少數(shù)細(xì)胞適合懸浮培養(yǎng)。 貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)： 容易更換培養(yǎng)液；容易采用灌注式培養(yǎng)、不需過(guò)濾系統(tǒng)；同一設(shè)備可采用不同的培養(yǎng)液/細(xì)胞的比例、適用于所有類型細(xì)胞。 ◆貼壁培養(yǎng)的缺點(diǎn)： 擴(kuò)大培養(yǎng)比較困難，投資大，占地面積大；不能有效監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)。 動(dòng)物細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的主要環(huán)節(jié)有哪些？ 1、潛伏期： （1）游離期：接種的細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)。 （2）吸附期：不同類型的細(xì)胞貼壁時(shí)間有所差異。 2、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期：懸浮細(xì)胞貼壁后經(jīng)過(guò)一段停滯后開(kāi)始分裂。隨著細(xì)胞數(shù)量增多，細(xì)胞間開(kāi)始接觸并連接成片，出現(xiàn)接觸性抑制。 3、停滯期：細(xì)胞長(zhǎng)滿載體表面，隨著營(yíng)養(yǎng)物消耗和代謝物積累，密度抑制現(xiàn)象出現(xiàn)，細(xì)胞開(kāi)始退化。如不及時(shí)傳代培養(yǎng)，細(xì)胞脫落死亡 （二）大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的操作方式 1、分批式培養(yǎng)2、流加式培養(yǎng)3、半連續(xù)式培養(yǎng)4、連續(xù)式培養(yǎng) 5、灌注式培養(yǎng) 2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的缺點(diǎn)： ①體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求較高。 ②動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，對(duì)環(huán)境條件要求嚴(yán)格。 ③體外培養(yǎng)的細(xì)胞與體內(nèi)生長(zhǎng)的細(xì)胞存在或多或少的差異 2、培養(yǎng)方法的發(fā)展 ◆雙蓋片懸滴培養(yǎng)法 ◆旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)的方法 ◆灌注小室培養(yǎng)法 良好微載體的特點(diǎn)： 1、好的生物相容性：無(wú)毒無(wú)害；2、好的黏附性：適于細(xì)胞附著、伸展和增殖，一般帶正電荷；3、大的比表面積：顆粒均勻，孔徑均一； 4、良好的傳質(zhì)性能；5、強(qiáng)的機(jī)械性能：保護(hù)細(xì)胞、重復(fù)利用；6、好的熱穩(wěn)定性：適合高壓蒸汽滅菌。 QQ截圖20140215184417.png QQ截圖20140215184450.png QQ截圖20140215184543.png QQ截圖20140215184712.png QQ截圖20140215184800.png [ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:11 ] |
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[考研] 0856材料化工調(diào)劑 總分330 +14 | zhubinhao 2026-03-27 | 14/700 |
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[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 12/600 |
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[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +6 | 烤麥芽 2026-03-27 | 8/400 |
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[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
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[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
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[考研] 336材料求調(diào)劑 +7 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 9/450 |
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[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +6 | 13831862839 2026-03-24 | 7/350 |
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