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TALEN和CRISPR/Cas9技術被評為2014年值得關注技術，CRISPR/Cas9技術的脫靶引起了關注
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在2014年《Nature methods》首刊中，作為最新的基因組編輯技術，TALEN和CRISPR/Cas9技術都被列為2014年值得關注的技術。文中指出，一方面TALEN不僅用于普通的基因修飾，還可將成熟的TALE用于修飾表觀基因組，另一方面也明確指出，CRISPR/Cas9脫靶現象一直是科學家們關注但無法從根本上消除的缺陷，這一缺陷的存在使得CRISPR/Cas9在臨床應用和科學研究中都受到很大局限。 TALEN作為成熟的基因修飾技術通過長度為40bp左右的識別序列定位目標基因，在特異位點修飾靶基因，已有文章證實TALEN不存在脫靶現象，現已成功應用于基因敲除、基因敲入、定點突變、microRNA和lncRNA敲除，同時利用TALE蛋白的定位把TALE連接上其他因子，如轉錄激活、抑制、甲基化酶等，用于其他方面的研究。CRISPR/Cas9作為基因編輯工具和TALEN一樣具有打靶目的基因的功能，但CRISPR/Cas9本身固有的脫靶效應讓研究者們對此一直束手無策，其脫靶效應的存在主要是因為與靶基因結合的序列長度僅20bp，且配對的20bp中只有靠近PAM處10-12bp堿基是核心序列，剩下的8-10bp堿基的錯配對靶位點的識別影響較小，而要想在一個基因組中產生特異性位點至少需要16個堿基的配對才可實現特異，所以CRISPR/Cas9脫靶的存在是顯而易見的。除此之外，CRISPR/Cas9對靶基因的識別是通過RNA與DNA的結合，二者結合的牢固性及識別的核心序列長度較短，容易造成脫靶。 過去一段時間有些研究者認為CRISPR/Cas9的向導RNA設計和構建比較簡單，TALEN質粒構建步驟繁瑣，所以盡管他們知道CRISPR/Cas9的脫靶嚴重，但仍選擇容易操作的CRISPR/Cas9，而現在FastTALE技術的出現使得TALEN質粒的構建可以很容易地在1天內完成，從而更能方便研究人員對TALEN技術的應用。 |
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