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有關間接競爭ELISA及標品稀釋問題 已有2人參與
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各位高手，本人研一，做的是基因工程抗體，最后一步要利用間接競爭ELISA測抑制率。我以前從沒接觸過ELISA，所以實驗中遇到了很多問題，懇請高手們耐心解答哈 我的標品是氰戊菊酯，是把氰戊菊酯溶于甲醇，配成1000ppm的。試驗時，用PBS稀釋成10ppm，1ppm，0.1ppm。空白對照是把標品換成PBS。 昨天，大老板蒞臨指導，說這樣做有問題。第一，對照組里沒有甲醇，這樣會不會對試驗結果又影響？第二，氰戊菊酯在水中的溶解度非常低（小于10μg/L),我在稀釋過程中可能會有一部分氰戊菊酯析出，導致實際加入標品的量偏小。 這兩個問題，大家能不能幫我解答一下，并幫我想想解決方法。 我做的間接競爭ELISA步驟如下： 1.包板過夜 2.乳粉封閉 3.加標品及樣品（樣品就是我做的基因工程抗體）（空白對照是加PBS及樣品） 4.加二抗 5.顯色 6.終止 |
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youlinglyw
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2樓2014-02-20 15:08:15
xiaxzhp
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【答案】應助回帖
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seven拂曉: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2014-03-13 11:44:01
seven拂曉: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2014-03-13 11:44:01
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1、你用PBS在稀釋標準品的時候稀釋倍數(shù)比較大，所以配制的標準品梯度里面含有的甲醇醇量是比較小的，這點微量的甲醇量在Elisa中沒有太大影響。 2、藥物在水中溶解度小，雖說高濃度是已經用甲醇溶解了的，但是不排除在用PBS梯度稀釋的時候其溶解度發(fā)生改變的情況而導致藥物析出（這個我曾經遇到過此類現(xiàn)象） 建議你在做標準品稀釋的時候，在PBS中加上10~20%的甲醇，此濃度的甲醇量對你的Elisa檢測影響不是特別大。 |
3樓2014-03-12 15:16:49
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