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2008011107金蟲 (初入文壇)
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[求助]
Southern雜交，目的樣品沒有條帶。求幫忙解釋原因。。。
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最近幾個(gè)月都在做Southern雜交，結(jié)果總是沒有條帶，或者條帶出現(xiàn)的地方很詭異。我把我的實(shí)驗(yàn)操作過程簡(jiǎn)單說一下，希望各路神仙大俠能幫忙分析下原因。 我實(shí)驗(yàn)的目的主要是想知道目的基因在基因組中有多少個(gè)拷貝。用的是羅氏的試劑盒。 1.探針來自目的基因序列Pcr擴(kuò)增后膠回收產(chǎn)物，點(diǎn)雜交后沒有問題。 2.基因組用酶切后正常，處于彌散狀。 3.堿變性后20xSSC轉(zhuǎn)膜 4.120度30分鐘固定 5.用試劑盒雜交液42度預(yù)雜交1h 6.42度雜交20h 7.低嚴(yán)謹(jǐn)和高嚴(yán)謹(jǐn)洗膜 9封閉2h 10.抗體孵育30min 11.洗膜2次，20min/次 12.檢測(cè)液平衡10min 13.顯色 結(jié)果：從右向左看：Marker（DM2000）居然有兩條條帶，目的樣品是兩種酶切產(chǎn)物都沒有條帶，陽性對(duì)照（是含有探針序列的質(zhì)粒DNA）有條帶。詭異的是，對(duì)照旁邊我沒加任何樣品，卻出現(xiàn)了非常整齊的條帶，大小及位置和質(zhì)粒樣品上的條帶一模一樣。 求專家同行幫忙解釋啊。。小女子在此謝過。。。 |
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2008011107
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