 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 5978 | 回復(fù): 15 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
hzxm0316鐵蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
轉(zhuǎn)化后菌液PCR鑒定，沒(méi)有目的條帶
|
||
|
PCR時(shí)得到目的片段800bp，亮且單一，可是連接轉(zhuǎn)化后，再菌液PCR鑒定，卻始終只有200bp左右的條帶，是怎么回事啊？有兩次菌液鑒定得到800bp的單一亮條帶，可是將測(cè)序結(jié)果提交到NCBI比對(duì)，卻是沒(méi)有找到相似序列？為什么就是轉(zhuǎn)化不出目的序列呢？哪位大俠路過(guò)，請(qǐng)幫忙解答，謝謝！ （載體為PUCm-T Vecter；宿主為E.coli 5a） （菌液鑒定：M13通用引物） 實(shí)驗(yàn)均按照生工生物T-載體PCR產(chǎn)物克隆試劑盒上規(guī)定操作 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有294人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn)
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 菌液PCR沒(méi)東西，但是提完質(zhì)粒能跑出來(lái)?xiàng)l帶，為什么��？
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 質(zhì)粒構(gòu)建
已經(jīng)有13人回復(fù)
- pfu擴(kuò)增，菌液PCR問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 菌落PCR無(wú)條帶
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 菌液PCR是陽(yáng)性，卻提不出來(lái)陽(yáng)性質(zhì)粒！求助
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 求幫忙分析下菌液PCR檢測(cè)結(jié)果
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 做一個(gè)克隆所需的最短時(shí)間？比比誰(shuí)更高效快速！
已經(jīng)有39人回復(fù)
- PCR鑒定與酶切鑒定
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 膠回收產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化后菌液PCR電泳條帶出現(xiàn)問(wèn)題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求PCR解！謝謝！
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌轉(zhuǎn)化PCR鑒定，沒(méi)有陽(yáng)性菌落
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR鑒定陽(yáng)性克隆時(shí)，總出現(xiàn)CK
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于引物
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】TA克隆
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】菌液PCR的經(jīng)驗(yàn)
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)菌液PCR的問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
chenguestc
木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MolEPI: 7
- 應(yīng)助: 576 (博士)
- 貴賓: 0.4
- 金幣: 4526.9
- 散金: 1639
- 紅花: 176
- 帖子: 4708
- 在線(xiàn): 353.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1337860
- 注冊(cè): 2011-07-05
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 作物分子育種
【答案】應(yīng)助回帖
1949stone: 回帖置頂 2012-08-31 07:24:17
1949stone: MolEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 很好 很充分 2012-08-31 07:24:42
1949stone: MolEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 很好 很充分 2012-08-31 07:24:42
|
如果分子量都不對(duì)，那我覺(jué)得是從最開(kāi)始找問(wèn)題應(yīng)該，每一步都CHECK一下。 PCR之后，跑膠，請(qǐng)加MARKER標(biāo)定PCR產(chǎn)物分子量。 回收之后，請(qǐng)把回收產(chǎn)物用2-3微升跑膠，看分子量是否正確。 如果正確，連接轉(zhuǎn)化。 轉(zhuǎn)化后涂平板，培養(yǎng)，挑取單克隆。 單克隆菌液同時(shí)用通用引物及你的特異引物做PCR驗(yàn)證分子量是否正確。 如果正確就大量培養(yǎng)，提取質(zhì)粒測(cè)序。 如果你們自己有測(cè)序儀，可以用純化的PCR產(chǎn)物來(lái)測(cè)序，前提是分子量是正確的話(huà)。 |
9樓2012-08-31 06:53:28
hzxm0316
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 132
- 帖子: 18
- 在線(xiàn): 18.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1649819
- 注冊(cè): 2012-02-28
- 專(zhuān)業(yè): 植物進(jìn)化生物學(xué)
12樓2012-09-02 16:06:03
2樓2012-08-30 09:58:02
gwd0312
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
“無(wú)冕之王”
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 131 (高中生)
- 金幣: 1973.2
- 紅花: 10
- 帖子: 418
- 在線(xiàn): 88.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1067565
- 注冊(cè): 2010-08-01
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 質(zhì)譜分析
3樓2012-08-30 10:14:59
4樓2012-08-30 10:38:37
chenguestc
木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MolEPI: 7
- 應(yīng)助: 576 (博士)
- 貴賓: 0.4
- 金幣: 4526.9
- 散金: 1639
- 紅花: 176
- 帖子: 4708
- 在線(xiàn): 353.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1337860
- 注冊(cè): 2011-07-05
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 作物分子育種
5樓2012-08-30 13:12:12
hzxm0316
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 132
- 帖子: 18
- 在線(xiàn): 18.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1649819
- 注冊(cè): 2012-02-28
- 專(zhuān)業(yè): 植物進(jìn)化生物學(xué)
6樓2012-08-30 16:27:31
hzxm0316
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 132
- 帖子: 18
- 在線(xiàn): 18.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1649819
- 注冊(cè): 2012-02-28
- 專(zhuān)業(yè): 植物進(jìn)化生物學(xué)
7樓2012-08-30 16:33:15
hzxm0316
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 132
- 帖子: 18
- 在線(xiàn): 18.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1649819
- 注冊(cè): 2012-02-28
- 專(zhuān)業(yè): 植物進(jìn)化生物學(xué)
8樓2012-08-30 16:34:15
xiongyaoling
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 11 (小學(xué)生)
- 金幣: 1056.2
- 散金: 50
- 紅花: 1
- 帖子: 109
- 在線(xiàn): 33小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1267368
- 注冊(cè): 2011-04-16
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
10樓2012-08-31 09:05:47
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 hzxm0316 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +7 | 一定有學(xué)上- 2026-03-14 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +12 | 生如夏花… 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +3 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +6 | 大可digkids 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +3 | 陌宸希 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中師范071000，325求調(diào)劑 +6 | RuitingC 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程315分求調(diào)劑 +3 | yang_0104 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +3 | zjy101327 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +5 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26考研求調(diào)劑 +5 | 丶宏Sir 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑材料專(zhuān)碩293 +6 | 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 | 6/300 |
|