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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 求PCR解！謝謝！
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[求助]
求PCR解！謝謝！
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大家好，求解PCR，希望大家指點一下。附件是我今天做的PCR結果。泳道14是陰性PCR對照即模板是2微升二次水，泳道11、12是陽性PCR結果，泳道2至10是待檢驗的菌液，（其中菌液是從構建的重組質粒中轉化BL21DE3后，挑取單克隆搖起的菌液，直接加2微升菌液進行的PCR）。請大家?guī)椭治鱿�，是否是陽性結果呢？還是根本就是假陽性的單克隆呢？謝謝了！ |
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yuxia82012
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2樓2011-04-28 16:16:01
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【答案】應助回帖
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西瓜(金幣+4, EPI+1): 鼓勵~ 2011-04-28 16:49:59
西瓜(金幣+4, EPI+1): 鼓勵~ 2011-04-28 16:49:59
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首先樓主你是想干什么？以后求助的時候一定得說清楚你想干什么？反正從你的帖子我沒有很明確看出來你想干什么？ 我猜：你是想驗證你的基因是不是已經(jīng)連接上了，然后就用菌液來進行PCR？如果正如我所說，我的建議如下： 1：泳道2有可能是對的，但是為神馬這么模糊，你的對照都這么亮？ 2：其它泳道不排除連上的概率，可以再進行一次PCR驗證，體系得改改啊。。。 3：可以將有可能對的菌液提取質粒進行PCR（質粒當模板）；或者酶切驗證。 PS:說說對于一般連接驗證的步驟: 1:可以用菌液，也可以將菌劃到板子上，我們常用后者；然后用菌液當模板進行PCR，結果會顯示哪一個菌能夠P出目的條帶； 2：將疑似正確的菌提取質粒，跑電泳，點上空質粒作為對照，如果連上的話一般重組質粒會稍微大一些； 3：酶切質粒，電泳驗證，記得點上酶切的基因和酶切的質粒進行對照。。。。 |
6樓2011-04-28 16:32:09
7樓2011-04-28 16:38:59
xiaoyu1014126
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9樓2011-04-28 16:52:45
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