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[求助]
求PCR解！謝謝！
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大家好，求解PCR，希望大家指點一下。附件是我今天做的PCR結(jié)果。泳道14是陰性PCR對照即模板是2微升二次水，泳道11、12是陽性PCR結(jié)果，泳道2至10是待檢驗的菌液，（其中菌液是從構(gòu)建的重組質(zhì)粒中轉(zhuǎn)化BL21DE3后，挑取單克隆搖起的菌液，直接加2微升菌液進行的PCR）。請大家?guī)椭治鱿拢欠袷顷栃越Y(jié)果呢？還是根本就是假陽性的單克隆呢？謝謝了！ |
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yuxia82012
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, EPI+1): Good！快檢的方法很好，我們實驗室也常用。 2011-04-28 16:54:30
西瓜(金幣+5, EPI+1): Good！快檢的方法很好，我們實驗室也常用。 2011-04-28 16:54:30
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我覺得驗證這種重組質(zhì)粒最好先快檢一下然后再提質(zhì)粒酶切，沒必要直接PCR。 快檢就是直接用搖起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿渦旋離心，取上清跑膠，對照上個空載體，就是沒有連片段前的質(zhì)粒（環(huán)合的哈），或者和你載體差不多大小的質(zhì)粒也可，一般連進去的重組質(zhì)粒會跑得慢點，憑這個就能鑒定哪些連進去了，然后再提質(zhì)粒酶切就好了 |
9樓2011-04-28 16:52:45
yuxia82012
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西瓜
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